| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1 色氨酸的理化性质 | 第9-10页 |
| 2 L-色氨酸的生理生化作用及用途 | 第10-14页 |
| 3 L-色氨酸的主要生产方法 | 第14-18页 |
| 4 色氨酸的基因工程 | 第18-20页 |
| 5 L-色氨酸的现状及前景展望 | 第20-22页 |
| 第二章 Trp A-E和Trp Operon-pET-22b(+)表达载体的构建与表达 | 第22-36页 |
| 一、材料与方法 | 第22-31页 |
| 1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2 培养基 | 第22页 |
| 3 实验仪器 | 第22页 |
| 4 Trp A-E和Trp operon与克隆载体pGEM-Teasy的连接 | 第22-28页 |
| 5 Trp A-E和Trp operon-pET-22b(+)的构建与表达 | 第28-31页 |
| 二、结果 | 第31-36页 |
| 1 Trp Operon基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 2 克隆重组质粒Teasy-TrpA-E和Trp operon的构建 | 第31-32页 |
| 3 TrpA-E和Trp operon基因序列测定 | 第32页 |
| 4 pET-22b(+)-TrpA-E/pET-22b(+)-Trp operon表达重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| 5 pET-22b(+)-TrpA-E/pET-22b(+)-Trp operon的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 6 pET-22b(+)-TrpA-E和pET-22b(+)-Trp operon在E.coli中的表达 | 第34-35页 |
| 7 重组质粒表达产物中的邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性测定 | 第35-36页 |
| 第三章 Trp A-E和Trp operon-pBV220的构建与表达 | 第36-42页 |
| 一、材料与方法 | 第36-38页 |
| 1 菌株与质粒 | 第36页 |
| 2 培养基及实验仪器 | 第36页 |
| 3 工具酶与试剂 | 第36页 |
| 4 E.coli 31884菌种的复苏培养及总DNA的提取 | 第36页 |
| 5 PCR引物设计与合成 | 第36-37页 |
| 6 pBV220-TrpA-E和pBV220-Trp operon的构建 | 第37页 |
| 7 控制的工程菌的诱导 | 第37页 |
| 8 表达产物的电泳分析及蛋白质定量分析 | 第37页 |
| 9 粗酶液的制备 | 第37页 |
| 10 邻氨基苯甲酸合成酶的活性测定及色氨酸合成酶的活性测定 | 第37-38页 |
| 二、实验结果 | 第38-42页 |
| 1 Trp Operon基因的PCR扩增 | 第38页 |
| 2 重组质粒pBV220-TrpA-E和pBV220-Trp operon的构建 | 第38-39页 |
| 3 克隆载体的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 4 TrpA-E和Trp operon基因序列测定 | 第40页 |
| 5 pBV220-TrpA-E/pBV220-Trp operon在E.coli中的表达 | 第40-41页 |
| 6 重组质粒表达产物中的邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性测定 | 第41-42页 |
| 第四章 pET-22b(+)-Trp operon的定点突变 | 第42-46页 |
| 一、实验材料与方法 | 第42-43页 |
| 1 实验材料 | 第42页 |
| 2 PCR引物设计与合成 | 第42页 |
| 3 PCR反应条件的建立 | 第42-43页 |
| 4 处理样品 | 第43页 |
| 5 磷酸化反应 | 第43页 |
| 6 连接与转化以及筛选阳性克隆 | 第43页 |
| 7 蛋白质电泳分析及酶活测定 | 第43页 |
| 二、实验结果 | 第43-46页 |
| 1 Trp Operon突变基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2 重组表达质粒pET-22b(+)-Trp Operon~M的构建和序列分析 | 第44页 |
| 3 重组质粒在E.coli中的表达 | 第44-45页 |
| 4 重组质粒表达产物中的邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性测定 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
