| 第一部分 JADOMYCIN B合成环化醉 JADD、JADI的基因敲除 | 第1-58页 |
| 文献综述 | 第11-29页 |
| 1 脂肪酸与聚酮生物合成过程的比较 | 第12-13页 |
| 2 聚酮基因簇的研究方法 | 第13-17页 |
| 2．1 基因克隆 | 第13-14页 |
| 2．2 DNA操作 | 第14页 |
| 2．3 基因阻断与基因置换 | 第14-16页 |
| 2．4 基因表达 | 第16-17页 |
| 3 芳香聚酮的生物合成 | 第17-20页 |
| 4 芳香聚酮化合物的环化与环化酶的研究进展 | 第20-23页 |
| 4．1 分子间的醛醇缩合机理 | 第20-21页 |
| 4．2 分子内的醛醇缩合-jadomyc in的可能环化机理 | 第21页 |
| 4．3 环化酶的研究进展与研究意义 | 第21-23页 |
| 5 Jadomyein B的生物合成 | 第23-29页 |
| 5．1 jadomycin B生物合成的基因簇 | 第24-26页 |
| 5．1．1 结构基因:jadJIABCEDFGHKLMNXOPQSTUV | 第24-26页 |
| 5．1．2 调控基因:jadW_1R_1R_2R~* | 第26页 |
| 5．2 jadomycin的生物合成 | 第26-28页 |
| 5．3 非酶催化反应 | 第28-29页 |
| 实验部分 | 第29-53页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| 1．1 菌种和质粒 | 第29页 |
| 1．2 酶和试剂 | 第29页 |
| 1．3 常用储存液 | 第29-30页 |
| 1．4 引物 | 第30页 |
| 1．5 仪器及其它 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-39页 |
| 2．1 培养基及其组成成分的配方 | 第30-33页 |
| 2．2 大肠杆菌的培养 | 第33页 |
| 2．3 委内瑞拉链霉菌的培养 | 第33页 |
| 2．4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2．5 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 2．6 大肠杆菌质粒快抽 | 第33-34页 |
| 2．7 大肠杆菌质粒的小量提取 | 第34页 |
| 2．8 重组质粒的构建 | 第34页 |
| 2．9 链霉菌原生质体的制备 | 第34-35页 |
| 2．10 链霉菌原生质体的转化(快速小量法) | 第35页 |
| 2．11 链霉菌基因组的提取 | 第35页 |
| 2．12 Polymerase chain reaction(PCR) | 第35-36页 |
| 2．13 D-Gal-L-Ile发酵产jadomycin B | 第36页 |
| 2．14 菌落PCR的方法 | 第36页 |
| 2．15 Southern杂交 | 第36-37页 |
| 2．16 基因删除突变株的筛选 | 第37-38页 |
| 2．17 插入失活突变株的筛选 | 第38页 |
| 2．18 HPLC分析突变株的发酵产物 | 第38页 |
| 2．19 LC-MS/MS分析突变株的发酵产物 | 第38页 |
| 2．20 TLC分离突变株的发酵产物 | 第38页 |
| 2．21 固相萃取柱分离发酵产物及 MS分析 | 第38页 |
| 2．22 突变株的互补 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-49页 |
| 3．1 基因删除载体的构建 | 第39-40页 |
| 3．1．1 pJD2的构建 | 第39页 |
| 3．1．2 PJI3的构建 | 第39-40页 |
| 3．2 插入失活载体的构建 | 第40-42页 |
| 3．2．1 pJDKa,pJDKb的构建 | 第40-41页 |
| 3．2．2 pJIKa,pJIKb的构建 | 第41-42页 |
| 3．3 插入失活突变株的筛选 | 第42-43页 |
| 3．3．1 VS210(jadD的正向插入失活)的筛选 | 第42页 |
| 3．3．2 VS212(jadI的反向插入失活)的筛选 | 第42-43页 |
| 3．3．3 VS213(jadI的正向插入失活)的筛选 | 第43页 |
| 3．4 D-Gal-L-Ile发酵分析 VS213，VS212，VS210，5230 | 第43-44页 |
| 3．5 HPLC分析 | 第44-45页 |
| 3．6 VS210产物TCC法分析、制备与HPLC检测 | 第45页 |
| 3．7 LC-MS/MS分析(ISP5230，VS210) | 第45-46页 |
| 3．8 VS213产物固相萃取柱分离及 HPLC、MS分析 | 第46-47页 |
| 3．9 jadD突变株互补载体(pUD)的构建与突变株的互补 | 第47-48页 |
| 3．9．1 互补载体pUD的构建 | 第47页 |
| 3．9．2 jadD突变株VS210的互补 | 第47-48页 |
| 3．10 jadI突变株互补载体的构建与突变株的互补 | 第48页 |
| 3．10．1 互补载体 pUI的构建 | 第48页 |
| 3．10．2 jadI突变株 VS212和 VS213的互补 | 第48页 |
| 3．11 基因删除突变株的筛选 | 第48-49页 |
| 4 讨论与结论 | 第49-53页 |
| 4．1 本实验中基因敲除 | 第49-50页 |
| 4．2 突变株产物分析 | 第50-51页 |
| 4．3 研究展望 | 第51-53页 |
| 4．3．1 JadD和 JadI的基因删除 | 第51-52页 |
| 4．3．2 JadI的定点突变 | 第52页 |
| 4．3．3 JadD的N端和 C端活性研究 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 第二部分 天蓝色链霉菌膜蛋白质组分析 | 第58-67页 |
| 文献综述 | 第58-60页 |
| 1 天蓝色链霉菌研究背景 | 第58页 |
| 2 蛋白组研究 | 第58-59页 |
| 3 链霉菌蛋白组研究进展 | 第59-60页 |
| 实验部分 | 第60-66页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| 1．1 菌种和试剂 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-61页 |
| 2．1 细胞培养 | 第60页 |
| 2．2 原生质体制备 | 第60页 |
| 2．3 PK保护 | 第60页 |
| 2．4 hpPK法制备内侧膜蛋白的混合肽样品 | 第60-61页 |
| 2．5 脱盐、冻干和超滤 | 第61页 |
| 2．6 液质联用串联质谱分析 | 第61页 |
| 2．7 数据处理及分析 | 第61页 |
| 2．8 跨膜区及功能分析 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-63页 |
| 3．1 S．coelicolor内侧膜蛋白组分析流程 | 第61页 |
| 3．2 内侧膜蛋白组鉴别 | 第61-62页 |
| 3．3 膜内在蛋白的拓扑位置 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 4．1 PK保护/hpPK法制备样品 | 第63页 |
| 4．2 MudPIT法鉴别S．coelicolor膜内侧蛋白组 | 第63-64页 |
| 4．3 鉴别的膜内在蛋白的拓扑学分析 | 第64页 |
| 4．4 鉴别的膜内侧蛋白的功能分析 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| 发表文章 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
