| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-39页 |
| ·聚酮和杂合抗生素 | 第11-19页 |
| ·抗生素简介 | 第11-12页 |
| ·聚酮类抗生素 | 第12-16页 |
| ·聚酮的组合合成 | 第16-18页 |
| ·杀假丝菌素(FR-008)PKS基因簇 | 第18-19页 |
| ·以大肠杆菌和链霉菌为宿主的异源基因表达 | 第19-30页 |
| ·在细菌中的基因表达和调节简介 | 第20页 |
| ·转录起始的调节是最主要的调节 | 第20-24页 |
| ·大肠杆菌异源表达系统 | 第24-26页 |
| ·以链霉菌为宿主的异源基因表达 | 第26-30页 |
| ·以植物为宿主的异源表达简介 | 第30-33页 |
| ·植物病虫害及转基因改良植物简介 | 第30-32页 |
| ·植物和真细菌的基因表达差异简介 | 第32页 |
| ·植物异源表达的宿主-载体系统 | 第32-33页 |
| ·与本论文有关的前期工作 | 第33-38页 |
| ·链霉菌FR-008的PKS可能是多功能的巨大蛋白质 | 第33页 |
| ·与FR-008合成有关的PKS基因的克隆及部分测序 | 第33-34页 |
| ·pHZ317，一个用于表达FR-008 PKS基因的pET-15b衍生物 | 第34页 |
| ·pHZ317仅产生很低量的100kDa PKS蛋白 | 第34-38页 |
| ·带有pHZ317的大肠杆菌不超量表达PKS蛋白的可能原因 | 第38页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第38-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-47页 |
| ·材料 | 第39-43页 |
| ·菌株 | 第39-40页 |
| ·质粒 | 第40-42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·酶及化学试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-47页 |
| ·大肠杆菌质粒提取方法 | 第43页 |
| ·大肠杆菌转化子的快速检测 | 第43页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·以大肠杆菌为宿主的诱导表达 | 第44页 |
| ·以链霉菌为宿主的表达 | 第44页 |
| ·链霉菌总蛋白的SDS-PAGE分析 | 第44页 |
| ·包含体蛋白的提纯 | 第44-45页 |
| ·抗体制备 | 第45页 |
| ·Western杂交 | 第45-46页 |
| ·抗生素FR-008的生物测定 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-103页 |
| ·用于在大肠杆菌中表达聚酮合酶(PKS)基因的质粒构建 | 第47-56页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·pHZ1051，一个携带有串联的P_R、P_L和P_(T7)的表达质粒 | 第47-49页 |
| ·pHZ1053，一个包含P_R和P_L但缺乏P_(T7)的表达质粒 | 第49-50页 |
| ·pHZ1052，一个具有P_R和P_(T7)但缺乏P_L的表达质粒 | 第50页 |
| ·pHZ1056，包含P_(T7)和一个PKS基因下游转录终止子的表达质粒 | 第50-52页 |
| ·包含较短PKS基因片段的表达质粒 | 第52-53页 |
| ·PKS表达质粒的比较 | 第53-56页 |
| ·两个Ⅰ型聚酮合酶(PKS)功能结构域在大肠杆菌中的表达 | 第56-66页 |
| ·下游的转录终止子并未使P_(T7)过量表达PKS | 第56-57页 |
| ·用BL21(DE3)得到比BL21(DE3)(pLysS)更高而且重复性更好的表达 | 第57页 |
| ·串联的P_R和P_L使PKS蛋白得到低量表达 | 第57-58页 |
| ·组合的P_R、P_L和P_(T7)使两种大小的PKS蛋白均超量表达 | 第58页 |
| ·过量表达的PKS蛋白在大肠杆菌中形成包含体 | 第58页 |
| ·P_R和P_(T7)的组合使PKS超量表达 | 第58-62页 |
| ·对P_R、P_(T7)的双重诱导反而降低了PKS表达 | 第62页 |
| ·较短的1.3 kb的PKS基因并不总是比2.7 kb的PKS基因表达水平高 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-66页 |
| ·FR-008聚酮合酶(PKS)特异性抗体 | 第66-71页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·免疫扩散 | 第66-67页 |
| ·通过Western杂交鉴定抗体 | 第67-68页 |
| ·利用Western印迹检测链霉菌FR-008衍生菌株PKS蛋白 | 第68-71页 |
| ·两个Ⅰ型聚酮合酶(PKS)功能结构域在变铅青链霉菌中的诱导表达 | 第71-81页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·常用的tipA启动子或ermE启动子不能在链霉菌中表达PKS蛋白 | 第71-73页 |
| ·带SCP2~*复制子的低拷贝表达质粒pHZ1065和pHZ1067的构建 | 第73页 |
| ·带pIJ101复制子的高拷贝表达质粒pHZ1068的构建 | 第73-76页 |
| ·PKS在双功能质粒pHZ1065、pHZ1067、pHZ1068的表达 | 第76-78页 |
| ·双结构域PKS的低水平表达引起宿主变铅青链霉菌ZX64表型变化 | 第78-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| ·启动子置换与链霉菌FR-008 PKS-ORF1的表位标记 | 第81-94页 |
| ·引言 | 第81-82页 |
| ·把HA表位标签插入2.7 kb的PKS基因 | 第82-84页 |
| ·带表位标签和P_R-cIts857或者ermEP_1P_2的5个整合质粒的构建 | 第84-88页 |
| ·整合质粒转化链霉菌DX600 | 第88页 |
| ·转化子的鉴定 | 第88-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| ·两个大肠杆菌和链霉菌表达载体的构建 | 第94-99页 |
| ·引言 | 第94页 |
| ·大肠杆菌表达载体pHZ330的构建 | 第94-96页 |
| ·可用相同的表达盒在链霉菌和大肠杆菌进行表达的双功能表达载体 | 第96页 |
| ·小结 | 第96-99页 |
| ·一个旨在植物中表达PKS的质粒的构建 | 第99-103页 |
| ·引言 | 第99页 |
| ·pHZ321的构建 | 第99-102页 |
| ·小结 | 第102-103页 |
| 4 总结和讨论 | 第103-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
