| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·L-精氨酸生物学意义及其应用 | 第7-9页 |
| ·L-精氨酸的生物学意义 | 第7页 |
| ·L-精氨酸的医疗作用 | 第7-8页 |
| ·L-精氨酸的其它作用及用途 | 第8-9页 |
| ·L-精氨酸生产现状 | 第9页 |
| ·L-精氨酸在传统诱变育种方面的研究进展 | 第9-10页 |
| ·L-精氨酸在基因工程育种方面的研究进展 | 第10页 |
| ·代谢工程 | 第10-13页 |
| ·L-精氨酸的生物合经成途径 | 第11-12页 |
| ·L-精氨酸的分解代谢途径 | 第12-13页 |
| ·N-乙酰谷氨酸激酶的研究进展 | 第13-14页 |
| ·本课题的立题意义与研究内容 | 第14-15页 |
| ·立题意义 | 第14页 |
| ·立题内容 | 第14-15页 |
| 第二章 钝齿棒杆菌乙酰谷氨酸激酶编码基因ARGB 的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第15-26页 |
| ·材料与方法 | 第15-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·培养基及培养条件 | 第15-16页 |
| ·工具酶及其它试剂 | 第16-17页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第17页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第18-19页 |
| ·N-乙酰谷氨酸激酶基因的克隆及表达质粒的构建 | 第19页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第19页 |
| ·蛋白SDS-PAGE 分析 | 第19页 |
| ·蛋白含量测定 | 第19页 |
| ·NAGK 活性测定 | 第19-20页 |
| ·结果与分析 | 第20-25页 |
| ·N-乙酰谷氨酸激酶基因argB 的克隆 | 第20页 |
| ·大肠杆菌表达质粒的构建 | 第20-23页 |
| ·argB 基因在大肠杆菌中的表达 | 第23-25页 |
| ·本章 小结 | 第25-26页 |
| 第三章 N-乙酰谷氨酸激酶的纯化及其酶学性质的初步研究 | 第26-32页 |
| ·材料与方法 | 第26-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·培养基及培养条件 | 第26页 |
| ·N-乙酰谷氨酸激酶的纯化 | 第26-27页 |
| ·N-乙酰谷氨酸激酶的酶活测定 | 第27页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第27页 |
| ·N-乙酰谷氨酸激酶活性研究 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·重组蛋白NAGK 的纯化 | 第27-28页 |
| ·重组NAGK 酶的最适温度及温度稳定性 | 第28-29页 |
| ·重组NAGK 酶的最适pH 及pH 稳定性 | 第29页 |
| ·金属离子对NAGK 的活性影响 | 第29-30页 |
| ·酶对底物N-乙酰谷氨酸的动力学分析 | 第30页 |
| ·本章 小结 | 第30-32页 |
| 第四章 N-乙酰谷氨酸激酶基因ARGB 在钝齿棒杆菌中的表达 | 第32-40页 |
| ·材料与方法 | 第32-35页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·工具酶及试剂 | 第33页 |
| ·钝齿棒杆菌感受态细胞的制备与电转化 | 第33页 |
| ·菌体生长的测定 | 第33页 |
| ·发酵液中还原糖的测定 | 第33页 |
| ·精氨酸的测定 | 第33-34页 |
| ·培养条件 | 第34页 |
| ·钝齿棒杆菌的酶活测定 | 第34页 |
| ·钝齿棒杆菌重组菌株与原始菌株的发酵特性比较 | 第34页 |
| ·重组钝齿棒杆菌质粒稳定性研究 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-39页 |
| ·重组钝齿棒杆菌的构建、筛选及鉴定 | 第35页 |
| ·重组钝齿棒杆菌C.C( pJC1-tac-argB)中NAGK 酶活的检测分析 | 第35页 |
| ·重组钝齿棒杆菌转化子的摇瓶发酵 | 第35-36页 |
| ·重组钝齿棒杆菌C.C2 与出发株C. crenatum SYPA 的发酵特性比较 | 第36-37页 |
| ·C.C2 与出发菌株C. crenatum SYPA 发酵液氨基酸色谱仪分析对比 | 第37-38页 |
| ·重组钝齿棒杆菌质粒稳定性研究 | 第38-39页 |
| ·本章 小结 | 第39-40页 |
| 结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40-41页 |
| 展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第47页 |
