| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·甘油的性质及研究现状 | 第7-8页 |
| ·甘油的理化性质及主要用途 | 第7页 |
| ·甘油的生产方法 | 第7-8页 |
| ·发酵法生产甘油 | 第8页 |
| ·产甘油假丝酵母的研究进展 | 第8页 |
| ·甘油的合成途径 | 第8-9页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶及其研究现状 | 第9页 |
| ·酵母转化的研究进展 | 第9-10页 |
| ·根癌农杆菌介导的酵母遗传转化 | 第10-13页 |
| ·根癌农杆菌介导酿酒酵母遗传转化机理 | 第10-11页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒载体系统的发展 | 第11页 |
| ·转基因酵母的遗传表达 | 第11-13页 |
| ·复制型（replicate plasmid）质粒 | 第11-12页 |
| ·整合型质粒（integrative plasmid） | 第12-13页 |
| ·影响根癌农杆菌介导转化转化率的主要因素 | 第13页 |
| ·本研究的立题背景和内容 | 第13-15页 |
| 第二章 产甘油假丝酵母甘油合成关键酶基因CgGPD1 多拷贝表达载体的构建 | 第15-25页 |
| ·材料与方法 | 第15-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·工具酶与试剂 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·PCR 引物 | 第16-17页 |
| ·产甘油假丝酵母染色体DNA 的制备 | 第17-18页 |
| ·PCR 扩增反应体系及反应条件 | 第18页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第18页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第18页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第18-19页 |
| ·A.tumefaciens LBA4404 感受态的制备 | 第19页 |
| ·电击转化A.tumefaciens LBA4404 | 第19页 |
| ·A.tumefaciens LBA4404 的质粒提取 | 第19-20页 |
| ·CgGPD1 与pMD-18T vector 的连接 | 第20页 |
| ·单拷贝表达载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1 的构建 | 第20页 |
| ·双拷贝表达载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1 的构建 | 第20-22页 |
| ·三拷贝表达载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1-CgGPD1 的构建 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-24页 |
| ·CgGPD1 基因的PCR 扩增 | 第22页 |
| ·pMD-18T-CgGPD1 的构建 | 第22页 |
| ·单拷贝表达载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1 的验证 | 第22-23页 |
| ·双拷贝表达载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1 的验证 | 第23页 |
| ·三拷贝表达载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1-CgGPD1 的验证 | 第23-24页 |
| ·电击转化A.tumefaciens LBA4404 | 第24页 |
| ·本章小结 | 第24-25页 |
| 第三章 产甘油假丝酵母甘油合成关键酶基因CgGPD1 在大肠杆菌中的表达研究 | 第25-30页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·工具酶与试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| ·含CgGPD1 不同拷贝数根癌农杆菌双元载体转化大肠杆菌JM109 | 第26页 |
| ·JM109(Ⅰ) 、JM109(Ⅱ) 、JM109(Ⅲ)在不同浓度NaCl 条件下培养 | 第26页 |
| ·JM109(Ⅰ) 、JM109(Ⅱ) 、JM109(Ⅲ)在不同葡萄糖浓度条件下培养 | 第26-27页 |
| ·GPDH 粗酶液的制备 | 第27页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶酶活测定 | 第27页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-29页 |
| ·不同浓度NaCl 对CgGPD1 表达的影响 | 第27-28页 |
| ·不同浓度葡萄糖对CgGPD1 表达的影响 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 第四章 根癌农杆菌介导 CgGPD1 转化产甘油假丝酵母及其转化子的初步发酵实验 | 第30-42页 |
| ·材料与方法 | 第30-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
