| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| ·引言 | 第11-12页 |
| ·蜘蛛丝的种类及其本质 | 第12-15页 |
| ·蜘蛛拖丝蛋白的结构及其优良品质 | 第15-18页 |
| ·蜘蛛拖丝蛋白的编码基因及其氨基酸序列特点 | 第18页 |
| ·蜘蛛丝蛋白的克隆表达 | 第18-20页 |
| ·蜘蛛丝蛋白的溶解和纺丝 | 第20-21页 |
| ·蜘蛛丝的应用前景 | 第21页 |
| ·课题研究的内容、目的和意义 | 第21-23页 |
| 第2章 实验材料和设计方案 | 第23-29页 |
| ·实验材料和仪器 | 第23-28页 |
| ·蜘蛛、菌株和质粒载体 | 第23页 |
| ·酶与试剂 | 第23-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·培养基和常用试剂的配制 | 第26-28页 |
| ·实验流程 | 第28-29页 |
| 第3章 蜘蛛基因组DNA的提取 | 第29-33页 |
| ·蜘蛛的解剖 | 第29页 |
| ·蜘蛛基因组DNA的提取 | 第29-32页 |
| ·尿素裂解法 | 第29-30页 |
| ·CTAB裂解法 | 第30-31页 |
| ·改进的基因组DNA提取试剂盒法 | 第31-32页 |
| ·品质鉴定 | 第32-33页 |
| ·电泳 | 第32页 |
| ·样本DNA纯度及含量的鉴定 | 第32-33页 |
| 第4章 蜘蛛基因组DNA的文库构建 | 第33-38页 |
| ·准备 | 第33页 |
| ·剪切基因组DNA | 第33-34页 |
| ·剪切DNA的末端补齐 | 第34页 |
| ·筛选末端补平的40 kb DNA片段 | 第34-35页 |
| ·回收40 kb DNA | 第35-36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·包装the CopyControl Fosmid Clones | 第36-37页 |
| ·测定CopyControl Fosmid Clones的包装滴定度 | 第37-38页 |
| 第5章 菌落原位杂交 | 第38-45页 |
| ·涂板与转膜 | 第38-39页 |
| ·大量细菌克隆的原位杂交筛选 | 第38-39页 |
| ·少量阳性克隆的进一步原位杂交筛选 | 第39页 |
| ·菌落的裂解和DNA与尼龙膜的结合 | 第39-40页 |
| ·寡核苷酸探针的放射性同位素标记和纯化 | 第40-42页 |
| ·用Exonuclease-free Klenow Fragment标记寡核苷酸探针 | 第40-41页 |
| ·用乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸探针 | 第41-42页 |
| ·杂交、洗膜与检测 | 第42-45页 |
| ·滤膜的预洗脱和预杂交 | 第42-43页 |
| ·杂交与洗膜 | 第43-44页 |
| ·杂交信号的分析和阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| 第6章 质粒提取和测序 | 第45-48页 |
| ·活化单克隆、保留菌种 | 第45页 |
| ·诱导Fosmid阳性单克隆获得高拷贝 | 第45-46页 |
| ·质粒提取 | 第46页 |
| ·电泳 | 第46-47页 |
| ·酶切分析 | 第47页 |
| ·测序 | 第47-48页 |
| 第7章 结果与分析 | 第48-66页 |
| ·蜘蛛基因组DNA的提取 | 第48-51页 |
| ·三种提取方法的比较 | 第48-50页 |
| ·尿素裂解法提取蜘蛛基因组DNA的原理 | 第50-51页 |
| ·尿素裂解法提取蜘蛛基因组DNA的特点 | 第51页 |
| ·蜘蛛基因组DNA Fosmid文库构建 | 第51-54页 |
| ·大腹圆蛛基因组大小的确定 | 第52页 |
| ·计算所建文库应该出现的克隆数 | 第52-53页 |
| ·基因组DNA Fosmid文库的包装滴定度 | 第53页 |
| ·涂板量 | 第53-54页 |
| ·杂交筛选 | 第54-57页 |
| ·杂交引物的设计与标记原理 | 第54-55页 |
| ·杂交温度和洗膜温度 | 第55-56页 |
| ·探针浓度 | 第56页 |
| ·杂交结果 | 第56-57页 |
| ·质粒提取、酶切鉴定和测序 | 第57-66页 |
| ·诱导阳性单克隆获得高拷贝 | 第57-58页 |
| ·质粒提取 | 第58-59页 |
| ·酶切分析 | 第59-61页 |
| ·测序 | 第61-66页 |
| 第8章 结论 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·创新点 | 第67页 |
| ·展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 硕士期间发表论文和参加科研情况说明 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
