| 致谢 | 第1-16页 |
| 摘要 | 第16-19页 |
| ABSTRACT | 第19-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-36页 |
| ·黄瓜花叶病毒 | 第22-27页 |
| ·黄瓜花叶病毒生物学特点 | 第22页 |
| ·黄瓜花叶病毒基因组结构 | 第22-23页 |
| ·黄瓜花叶病毒卫星RNA | 第23页 |
| ·黄瓜花叶病毒各(亚)基因组的复制、积累与寄主症状产生之间的关系 | 第23-24页 |
| ·病毒侵染与植物miRNA之间的关系 | 第24-27页 |
| ·植物病毒的检测方法 | 第27-30页 |
| ·生物学检测法 | 第27页 |
| ·血清学检测法 | 第27-28页 |
| ·电子显微镜检测法 | 第28-29页 |
| ·电镜负染检测法 | 第28页 |
| ·电镜超薄切片法 | 第28页 |
| ·免疫电镜检测法 | 第28-29页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第29-30页 |
| ·核酸分子杂交技术 | 第29页 |
| ·双链RNA电泳技术 | 第29页 |
| ·聚合酶链式反应技术 | 第29-30页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR技术及其在植物病毒研究中的应用 | 第30-34页 |
| ·荧光定量PCR技术的原理 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR技术的种类 | 第30-33页 |
| ·荧光染料法 | 第31-32页 |
| ·荧光探针法 | 第32-33页 |
| ·实时荧光定量PCR的特点 | 第33页 |
| ·荧光定量PCR在植物病毒研究中的应用 | 第33-34页 |
| ·本论文的研究内容与目的 | 第34-36页 |
| ·研究内容 | 第35页 |
| ·预期目标 | 第35-36页 |
| 第二章 黄瓜花叶病毒荧光定量PCR实验分析体系的建立 | 第36-55页 |
| ·材料与方法 | 第37-43页 |
| ·寄主植物 | 第37页 |
| ·病毒 | 第37页 |
| ·酶与试剂 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·植物总RNA提取 | 第37-38页 |
| ·标准品的制备 | 第38-39页 |
| ·酶切 | 第38页 |
| ·体外转录 | 第38-39页 |
| ·标准品拷贝数计算 | 第39页 |
| ·病毒粒子的制备 | 第39-40页 |
| ·病毒粒子中CMV基因组RNAs的制备 | 第40页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·反转录(RT)反应: | 第40页 |
| ·普通PCR反应: | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR: | 第41页 |
| ·Lab-on-a-Chip分析CMV病毒粒子中各基因组的含量 | 第41-42页 |
| ·制胶 | 第42页 |
| ·注胶 | 第42页 |
| ·加样 | 第42页 |
| ·Northern杂交分析CMV病毒粒子中各基因组的含量 | 第42页 |
| ·数据处理 | 第42-43页 |
| ·荧光定量标准曲线的制作 | 第43页 |
| ·荧光定量PCR效率计算 | 第43页 |
| ·Northern杂交信号处理 | 第43页 |
| ·Lab-on-a-Chip数据分析 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-52页 |
| ·CMV-Fny基因组RNAs的体外转录 | 第43-44页 |
| ·荧光定量PCR反应条件的优化 | 第44页 |
| ·引物的筛选 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增特异性的验证 | 第45-47页 |
| ·标准曲线的建立以及定量检测范围的确定 | 第47页 |
| ·荧光定量PCR确定CMV-Fny病毒粒子中各基因组的拷贝数 | 第47-50页 |
| ·Lab-on-a-Chip确定CMV-Fny病毒粒子中各基因组的拷贝数 | 第50页 |
| ·Norther杂交确定CMV-Fny病毒粒子中各基因组的拷贝数 | 第50-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 荧光定量PCR分析卫星RNA对黄瓜花叶病毒各基因组时序表达的影响 | 第55-62页 |
| ·材料与方法 | 第55-56页 |
| ·毒源和寄主植物 | 第55页 |
| ·酶与试剂 | 第55页 |
| ·植物总RNA提取 | 第55页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第55-56页 |
| ·Northern杂交 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·CMV-Fny各基因的含量在烟草不同叶位上的变化 | 第56页 |
| ·荧光定量PCR分析Sat369对CMV-Fny各基因累积的影响 | 第56-59页 |
| ·Northern杂交分析Sat369对CMV-Fny各基因累积的的影响 | 第59-60页 |
| ·小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 荧光定量PCR试验数据的处理 | 第62-75页 |
| ·材料和方法 | 第63-66页 |
| ·寄主植物 | 第63页 |
| ·病毒 | 第63页 |
| ·酶与试剂 | 第63页 |
| ·病毒粒子提取 | 第63页 |
| ·总RNA提取 | 第63页 |
| ·标准品的制备 | 第63页 |
| ·荧光定量PCR | 第63页 |
| ·实验数据处理 | 第63-66页 |
| ·SCF法处理荧光定量PCR数据 | 第64页 |
| ·LinReg程序处理荧光定量PCR数据 | 第64-66页 |
| ·DART程序处理荧光定量PCR数据 | 第66页 |
| ·利用N_0值对不同基因的含量进行比较 | 第66页 |
| ·Northern杂交 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-72页 |
| ·标准曲线计算病毒粒子中CMV各基因组的含量 | 第66-68页 |
| ·SCF法计算病毒粒子中CMV各基因组的含量 | 第68-69页 |
| ·LinReg PCR和DART程序计算病毒粒子中CMV各基因组的含量 | 第69-70页 |
| ·Northern杂交分析病毒粒子中CMV各基因组的含量 | 第70-71页 |
| ·利用N_0计算Tl-sat对CMV基因组累积的影响 | 第71-72页 |
| ·小结与讨论 | 第72-75页 |
| 第五章 病毒侵染引起番茄MIRNA差异表达的研究 | 第75-87页 |
| ·材料和方法 | 第77-79页 |
| ·寄主植物 | 第77-78页 |
| ·病毒 | 第78页 |
| ·酶与试剂 | 第78页 |
| ·总RNA提取及小RNA分离 | 第78页 |
| ·芯片设计 | 第78页 |
| ·芯片杂交 | 第78-79页 |
| ·结果与分析 | 第79-84页 |
| ·病毒侵染在番茄上引起的症状 | 第79页 |
| ·植物保守性miRNA在番茄上的检测验证 | 第79-80页 |
| ·病毒侵染对番茄miRNA表达的影响 | 第80-84页 |
| ·小结与讨论 | 第84-87页 |
| ·植物miRNAs的保守性分析 | 第84-85页 |
| ·番茄miRNAs的差异表达 | 第85-87页 |
| 第六章 荧光定量RT-PCR检测番茄MIRNA对病毒侵染的响应 | 第87-111页 |
| ·材料和方法 | 第88-95页 |
| ·寄主植物 | 第88页 |
| ·病毒 | 第88页 |
| ·酶与试剂 | 第88页 |
| ·总RNA提取 | 第88页 |
| ·扩增部分miRNA的靶基因序列 | 第88-93页 |
| ·mRNA纯化 | 第88-89页 |
| ·合成第一链cDNA | 第89页 |
| ·套式PCR反应 | 第89-91页 |
| ·PCR产物割胶回收、克隆 | 第91-93页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第93-95页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第95页 |
| ·实验数据处理 | 第95页 |
| ·结果与分析 | 第95-105页 |
| ·CMV和TAV侵染番茄引起的症状 | 第96页 |
| ·番茄ARF8与AGOl基因的克隆和鉴定 | 第96-98页 |
| ·stem-loop real-time RT-PCR实验体系的分析验证 | 第98-100页 |
| ·病毒侵染后番茄7条miRNAs表达量的变化 | 第100-103页 |
| ·病毒侵染后番茄靶标mRNAs表达量的变化 | 第103-105页 |
| ·小结与讨论 | 第105-111页 |
| ·植物miRNA的荧光定量PCR分析 | 第105-106页 |
| ·番茄miRNA芯片杂交和荧光定量PCR分析结果比较 | 第106-107页 |
| ·CMV和TAV侵染引起番茄miRNAs和靶标mRNAs的差异表达 | 第107-111页 |
| 总结 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-120页 |
| 附件Ⅰ:重要溶液的配制 | 第120-122页 |
| 附件Ⅱ:作者简历 | 第122-123页 |
