| 论文创新点 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 研究意义 | 第19-20页 |
| 技术路线 | 第20-21页 |
| 第一部分 文献综述 | 第21-55页 |
| 第一章 IL-2的体内生物学 | 第21-37页 |
| 1 IL-2 | 第22-23页 |
| 2 IL-2R | 第23-24页 |
| 3 IL-2和IL-2R的体内表达 | 第24-26页 |
| 4 IL-2与自身免疫的遗传基础 | 第26-27页 |
| 5 IL-2与Treg细胞发育 | 第27-29页 |
| 6 IL-2与Treg细胞动态平衡 | 第29-30页 |
| 7 IL-2与诱导型Treg细胞 | 第30-31页 |
| 8 IL-2与Treg细胞程序 | 第31-32页 |
| 9 IL-2与初级免疫应答 | 第32-33页 |
| 10 IL-2与记忆T细胞 | 第33-34页 |
| 11 IL-2靶向的免疫治疗 | 第34-37页 |
| 第二章 IL-2与其受体a、β、γc的四元体结构研究 | 第37-45页 |
| 1 整体结构 | 第37-39页 |
| 2 IL-2/IL-2Rα | 第39-40页 |
| 3 IL-2/IL-2Rβ | 第40-41页 |
| 4 IL-2/γc | 第41-42页 |
| 5 IL-2Rβ/γc | 第42-43页 |
| 6 γc识别细胞因子功能的退化 | 第43-45页 |
| 第三章 噬菌体展示技术研究进展 | 第45-55页 |
| 1 噬菌体展示技术的原理 | 第45页 |
| 2 噬菌体展示系统 | 第45-49页 |
| ·单链丝状噬菌体展示系统 | 第46-47页 |
| ·λ噬菌体展示系统 | 第47-48页 |
| ·T4噬菌体展示系统 | 第48页 |
| ·T7噬菌体展示系统 | 第48-49页 |
| 3 噬菌体展示技术的优势和局限性 | 第49-51页 |
| ·优势 | 第49-50页 |
| ·局限性 | 第50-51页 |
| 4 噬菌体展示技术的应用 | 第51-54页 |
| ·开发新型疫苗 | 第51-52页 |
| ·在疾病发生机理和治疗中的应用 | 第52页 |
| ·在抗体工程中的应用 | 第52-53页 |
| ·模拟表位的筛选 | 第53页 |
| ·DNA结合蛋白研究 | 第53-54页 |
| ·蛋白质组学的研究 | 第54页 |
| 5 结语 | 第54-55页 |
| 第二部分 研究内容 | 第55-139页 |
| 第一章 鸡白细胞介素2功能域的鉴定 | 第55-82页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-69页 |
| ·重组原核表达质粒的构建及序列测定 | 第57-58页 |
| ·可溶性rcIL-2的原核表达和单体分离 | 第58-60页 |
| ·诱导表达 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot鉴定 | 第58页 |
| ·天然纯化 | 第58-59页 |
| ·凝胶过滤纯化单体 | 第59页 |
| ·天然可溶性单体氧化复性策略 | 第59页 |
| ·天然电泳分析 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第60-61页 |
| ·动物免疫 | 第60页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立、筛选及克隆化 | 第60页 |
| ·腹水的制备与纯化 | 第60-61页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第61-63页 |
| ·ELISA | 第61页 |
| ·Western blot | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体Ig类别、亚类测定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的真核表位识别鉴定 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体的生物学功能鉴定 | 第63-64页 |
| ·重叠合成肽扫描技术分析单克隆抗体的识别表位 | 第64-65页 |
| ·功能性单克隆抗体的模拟表位淘选 | 第65-68页 |
| ·淘选程序 | 第65-66页 |
| ·噬菌体滴度测定 | 第66-67页 |
| ·噬菌体测序模板提取 | 第67-68页 |
| ·Phage ELISA | 第68页 |
| ·多肽竞争ELISA | 第68页 |
| ·表位多肽的生物学活性鉴定 | 第68-69页 |
| ·cIL-2的三维结构模型构建 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-79页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-cIL-2的构建及鉴定 | 第69-70页 |
| ·可溶性表达蛋白的SDS-PAGE和Western-blotting鉴定 | 第70-72页 |
| ·功能性单克隆抗体的制备 | 第72-73页 |
| ·cIL-2重叠多肽与单克隆抗体的反应性鉴定 | 第73-74页 |
| ·单克隆抗体噬菌体模拟位的淘选及鉴定 | 第74-77页 |
| ·表位多肽的生物活性分析 | 第77-78页 |
| ·构象型功能域在cIL-2三维结构中的定位 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| 第二章 鸭白细胞介素2功能域的鉴定 | 第82-91页 |
| 1 材料 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-84页 |
| ·单克隆抗体的腹水制备和纯化 | 第82-83页 |
| ·单克隆抗体的模拟表位淘选 | 第83页 |
| ·Phage ELISA | 第83页 |
| ·多肽竞争ELISA | 第83-84页 |
| ·dIL-2的三维结构模型构建 | 第84页 |
| 3 结果 | 第84-88页 |
| ·单克隆抗体噬菌体模拟位的淘选及鉴定 | 第84-87页 |
| ·功能域在dIL-2三维结构中的定位 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-91页 |
| 第三章 鹅白细胞介素2功能域的鉴定 | 第91-103页 |
| 1 材料 | 第91页 |
| 2 方法 | 第91-94页 |
| ·单克隆抗体的腹水制备和纯化 | 第91-92页 |
| ·单克隆抗体的生物学功能鉴定 | 第92-93页 |
| ·单克隆抗体的模拟表位淘选 | 第93页 |
| ·Phage ELISA | 第93页 |
| ·多肽竞争ELISA | 第93-94页 |
| ·gIL-2的三维结构模型构建 | 第94页 |
| 3 结果 | 第94-100页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第94-95页 |
| ·单克隆抗体的中和活性分析 | 第95页 |
| ·单克隆抗体噬菌体模拟位的淘选及鉴定 | 第95-98页 |
| ·功能域在gIL-2三维结构中的定位 | 第98-100页 |
| 4 讨论 | 第100-103页 |
| 第四章 cIL-2Rα功能域的鉴定 | 第103-113页 |
| 1 材料 | 第103页 |
| 2 方法 | 第103-106页 |
| ·单克隆抗体的腹水制备和纯化 | 第103-104页 |
| ·单克隆抗体的生物学功能鉴定 | 第104页 |
| ·ConA活化的SMCs表达cCD25的动力学分析 | 第104-105页 |
| ·单克隆抗体的模拟表位淘选 | 第105页 |
| ·Phage ELISA | 第105页 |
| ·多肽竞争ELISA | 第105-106页 |
| ·cCD25胞外域三维结构模型构建 | 第106页 |
| 3 结果 | 第106-111页 |
| ·单克隆抗体的中和活性分析 | 第106-107页 |
| ·ConA刺激下SMCs表达cCD25的动力学分析 | 第107-108页 |
| ·单克隆抗体噬菌体模拟位的淘选及鉴定 | 第108-110页 |
| ·功能域在cCD25胞外域三维结构中的定位 | 第110-111页 |
| 4 讨论 | 第111-113页 |
| 第五章 cIL-2Rγ功能域的鉴定 | 第113-123页 |
| 1 材料 | 第113页 |
| 2 方法 | 第113-116页 |
| ·单克隆抗体的腹水制备和纯化 | 第113-114页 |
| ·单克隆抗体的生物学功能鉴定 | 第114页 |
| ·ConA活化的SMCs表达cCD132的动力学分析 | 第114-115页 |
| ·单克隆抗体的模拟表位淘选 | 第115页 |
| ·Phage ELISA | 第115页 |
| ·多肽竞争ELISA | 第115-116页 |
| ·cCD132胞外域三维结构模型构建 | 第116页 |
| 3 结果 | 第116-120页 |
| ·单克隆抗体的中和活性分析 | 第116-117页 |
| ·ConA刺激下SMCs表达cCD132的动力学分析 | 第117-118页 |
| ·单克隆抗体噬菌体模拟位的淘选及鉴定 | 第118-119页 |
| ·功能域在cCD132胞外域三维结构中的定位 | 第119-120页 |
| 4 讨论 | 第120-123页 |
| 第六章 cIL-2与cIL-2Rα、γ的相互作用 | 第123-139页 |
| 1 材料 | 第123-124页 |
| 2 方法 | 第124-128页 |
| ·鸡白介素2受体α、γ的cIL-2结合模拟表位淘选 | 第124页 |
| ·鸡白介素2的受体结合模拟表位淘选 | 第124页 |
| ·Phage ELISA | 第124-125页 |
| ·cIL-2与cCD25的相互作用分析 | 第125-126页 |
| ·cIL-2与cCD132的相互作用分析 | 第126-127页 |
| ·cIL-2R间的相互作用分析 | 第127页 |
| ·cIL-2表位多肽的生物活性分析 | 第127页 |
| ·cIL-2表位多肽与cIL-2R表位多肽相互作用的生物活性分析 | 第127-128页 |
| ·cIL-2和其受体α、γ作用位点的三维结构定位 | 第128页 |
| 3 结果 | 第128-136页 |
| ·鸡白介素2受体α、γ的cIL-2结合表位的淘选及鉴定 | 第128-129页 |
| ·鸡白介素2的cIL-2R结合表位的淘选及鉴定 | 第129-130页 |
| ·cIL-2与cCD25的相互作用 | 第130-132页 |
| ·cIL-2与cCD132的相互作用 | 第132-133页 |
| ·cIL-2R间的相互作用 | 第133-134页 |
| ·cIL-2表位多肽与其受体表位多肽相互作用的生物学功能验证 | 第134-136页 |
| ·cIL-2和其受体作用位点的三维结构定位 | 第136页 |
| 4 讨论 | 第136-139页 |
| 全文总结 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-150页 |
| 第三部分 附录 | 第150-166页 |
| 附录A 全文缩略语 | 第150-152页 |
| 附录B 常用试剂及仪器 | 第152-156页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第156-165页 |
| 附录D 攻博期间发表或录用的学术论文 | 第165-166页 |
| 致谢 | 第166页 |
