| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 影响扦插生根的因素 | 第11-12页 |
| 1.1.1 遗传特性 | 第11页 |
| 1.1.2 扦插穗件 | 第11页 |
| 1.1.3 发育阶段 | 第11-12页 |
| 1.2 不定根发生机理的研究 | 第12-15页 |
| 1.2.1 不定根发生的组织解剖学研究进展 | 第12页 |
| 1.2.2 激素对不定根发生的生理生化研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.3 生长素信号通路对不定根发生研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.5 转录因子调控不定根发生的分子机理研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 童性与不定根发生的关系研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 童性与氧化还原的关系 | 第15-16页 |
| 1.3.2 氧化还原对不定根发生的调控 | 第16页 |
| 1.3.3 miR156对不定根发生的调控作用 | 第16-17页 |
| 1.4 苹果砧木无性繁殖技术及不定根发生机理研究进展 | 第17页 |
| 1.4.1 苹果砧木不定根诱导技术研究进展 | 第17页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-26页 |
| 2.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 试验试剂和仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 试验用菌株和载体 | 第19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 扦插、管理及样品采集 | 第19-20页 |
| 2.2.2 生根率统计 | 第20页 |
| 2.2.3 绿枝插穗不定根发生过程组织学观察 | 第20页 |
| 2.2.4 DNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.5 DNA甲基化分析 | 第21页 |
| 2.2.6 植物总RNA的提取及质量检测 | 第21页 |
| 2.2.7 反转录cDNA及基因表达分析 | 第21页 |
| 2.2.8 小RNA提取及miR156相对表达量分析 | 第21-22页 |
| 2.2.9 miR156靶向SPL克隆和定点突变 | 第22-23页 |
| 2.2.10 定点突变SPL过表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.11 烟草转基因及阳性植株筛选 | 第24页 |
| 2.2.12 转基因植株不定根发生能力的研究 | 第24页 |
| 2.2.13 数据处理及作图 | 第24页 |
| 2.2.14 RNA提取、建库及RNA-seq | 第24页 |
| 2.2.15 原始序列处理和比对到基因组 | 第24页 |
| 2.2.16 转录本组装和基因表达分析 | 第24-25页 |
| 2.2.17 主成分分析(PCA) | 第25页 |
| 2.2.18 Gene ontology(GO)富集分析和通路富集分析 | 第25页 |
| 2.2.19 共表达模块和中心基因的鉴定 | 第25页 |
| 2.2.20 RNA-seq差异表达基因上有调控序列预测分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与分析 | 第26-56页 |
| 3.1 童性对'中砧1号'绿枝扦插不定根发生能力的影响 | 第26-27页 |
| 3.2 '中砧1号'绿枝扦插生根过程组织学观察 | 第27-28页 |
| 3.3 扦插生根过程'中砧1号'童期和成龄期插穗基因表达分析 | 第28-30页 |
| 3.3.1 生长素响应因子(ARF)的表达分析 | 第28-29页 |
| 3.3.2 生长素极性运输基因(PIN)的表达分析 | 第29页 |
| 3.3.3 不定根发生相关基因MxRTCS-like基因表达分析 | 第29-30页 |
| 3.4 miR156对不定根发生的调控 | 第30-36页 |
| 3.4.1 miR156在'中砧1号'(Mx-J、Mx-A和Mx-R)插穗茎皮中的表达分析 | 第30-31页 |
| 3.4.2 miR156过表达和抑制表达烟草不定根发生能力分析 | 第31-34页 |
| 3.4.3 IAA和NPA处理对miR156过表达和抑制表达转基因烟草不定根发生的影响 | 第34-36页 |
| 3.5 miR156过表达和抑制表达烟草不定根发生过程ARF,PIN和RTCS基因的表达变化 | 第36-38页 |
| 3.6 miR156靶向的MxSPL对不定根发生的影响 | 第38-45页 |
| 3.6.1 MxSPL CDS全长的克隆与序列分析 | 第38-40页 |
| 3.6.2 MxSPL定向的靶点突变与序列分析 | 第40页 |
| 3.6.3 过表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.6.4 rMxSPL转基因烟草的研究 | 第41-45页 |
| 3.6.5 MxSPL20, MxSPL21&22和MxSPL26在'中砧1号'中表达模式 | 第45页 |
| 3.7 中砧1号成龄期插穗难以诱导不定根的RNA-seq分析 | 第45-56页 |
| 3.7.1 中砧1号童性和成龄材料绿枝扦插生根情况 | 第45-46页 |
| 3.7.2 测序文库构建、数据组装、质量评估、功能注释和差异基因分析 | 第46-47页 |
| 3.7.3 qRT-PCR对RNA-seq数据的验证 | 第47-48页 |
| 3.7.4 IBA处理后,Mx-J和Mx-A差异表达基因分析 | 第48-53页 |
| 3.7.5 差异表达基因上游调控序列预测分析 | 第53-55页 |
| 3.7.6 Mx-J插穗IBA诱导后显著上调表达的转录因子 | 第55-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-61页 |
| 4.1 外源生长素诱导和miR156的高水平表达是不定根发生的必要条件 | 第56页 |
| 4.2 miR156不通过影响PIN和ARF基因表达调控不定根的发生 | 第56-58页 |
| 4.3 miR156主要通过MxSPL26调控'中砧1号'绿枝扦插不定根发生 | 第58页 |
| 4.4 成龄期'中砧1号'主动抵抗外源生长素处理致其扦插难生根 | 第58-60页 |
| 4.4.1 Mx-A插穗IBA处理后HB13基因快速响应进而诱导下游基因表达变化 | 第58-59页 |
| 4.4.2 Mx-A插穗IBA处理后形成层细胞再分化受到抑制造成其难生根 | 第59-60页 |
| 4.4.3 Mx-J插穗响应IBA处理后诱导不定根发生的分子机制 | 第60页 |
| 4.5 GABA可能抑制不定根发生 | 第60-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 个人简介 | 第75页 |
