摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-9页 |
第1章 绪论 | 第9-21页 |
·B23 蛋白和细胞命运调控 | 第9-14页 |
·B23 简介 | 第9-10页 |
·B23 的结构分析 | 第10-11页 |
·B23 的功能分析 | 第11-14页 |
·Eg5 蛋白与细胞周期调控 | 第14-19页 |
·Eg5 简介 | 第15-18页 |
·Eg5 的功能及在肿瘤治疗中的作用 | 第18-19页 |
·酵母双杂交系统和 ATP 酶的耦合分析系统 | 第19-21页 |
·酵母双杂交系统 | 第19页 |
·ATP 酶的耦合分析系统 | 第19-21页 |
第2章 实验结果及讨论 | 第21-42页 |
·结果 | 第21-38页 |
·Eg5 被筛选并鉴定为与B23 发生相互作用的新分子 | 第21-25页 |
·B23 与Eg5 发生相互作用 | 第25-27页 |
·B23 通过其DRBD 结构域与Eg5 的动力结构域发生相互作用 | 第27-29页 |
·与Eg5 相反,B23 抑制微管解聚,促进微管聚集 | 第29-33页 |
·B23 抑制微管解聚的功能是通过直接抑制Eg5 的ATP 酶活实现的 | 第33-38页 |
·讨论与分析 | 第38-42页 |
第3章 实验材料与方法 | 第42-61页 |
·实验材料 | 第42-43页 |
·细胞系及培养液 | 第42页 |
·大肠杆菌菌株及酵母株 | 第42页 |
·酵母双杂交系统 | 第42页 |
·表达载体 | 第42页 |
·主要试剂、抗体以及试剂盒 | 第42-43页 |
·其它 | 第43页 |
·实验方法 | 第43-61页 |
·Total RNA 的提取 | 第43-44页 |
·RT-PCR | 第44页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
·回收DNA 片段 | 第45页 |
·PCR | 第45-46页 |
·酶切 | 第46页 |
·连接 | 第46-47页 |
·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第47页 |
·转化 | 第47页 |
·抽提质粒检测构建状况 | 第47-48页 |
·酵母小规模转化 | 第48-49页 |
·提取酵母蛋白 | 第49页 |
·SDS-PAGE 电泳 | 第49-50页 |
·Western Blotting | 第50-51页 |
·酵母自激活的检测 | 第51页 |
·大规模转化 | 第51-52页 |
·液氮变蓝实验 | 第52页 |
·抽提酵母质粒 | 第52页 |
·电转化大肠杆菌 | 第52-53页 |
·蛋白诱导及纯化 | 第53-54页 |
·考马斯亮蓝染色 | 第54页 |
·细胞培养 | 第54-55页 |
·免疫共沉淀 | 第55页 |
·免疫荧光(专用于细胞骨架染色) | 第55-56页 |
·细胞核质组分分离 | 第56页 |
·微管分离实验 | 第56-57页 |
·体外微管提纯实验(两个循环的解聚聚合) | 第57-58页 |
·体内微管及微观结合蛋白的提取 | 第58页 |
·体外微管聚合实验 | 第58-59页 |
·Steady-state ATPase 酶活检测 | 第59页 |
·活细胞实时摄影 | 第59-61页 |
参考文献 | 第61-64页 |
致谢 | 第64-66页 |
在读期间发表的学术论文 | 第66页 |