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B23通过抑制Eg5ATP酶活性抑制Eg5对微管的解聚

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
第1章 绪论第9-21页
   ·B23 蛋白和细胞命运调控第9-14页
     ·B23 简介第9-10页
     ·B23 的结构分析第10-11页
     ·B23 的功能分析第11-14页
   ·Eg5 蛋白与细胞周期调控第14-19页
     ·Eg5 简介第15-18页
     ·Eg5 的功能及在肿瘤治疗中的作用第18-19页
   ·酵母双杂交系统和 ATP 酶的耦合分析系统第19-21页
     ·酵母双杂交系统第19页
     ·ATP 酶的耦合分析系统第19-21页
第2章 实验结果及讨论第21-42页
   ·结果第21-38页
     ·Eg5 被筛选并鉴定为与B23 发生相互作用的新分子第21-25页
     ·B23 与Eg5 发生相互作用第25-27页
     ·B23 通过其DRBD 结构域与Eg5 的动力结构域发生相互作用第27-29页
     ·与Eg5 相反,B23 抑制微管解聚,促进微管聚集第29-33页
     ·B23 抑制微管解聚的功能是通过直接抑制Eg5 的ATP 酶活实现的第33-38页
   ·讨论与分析第38-42页
第3章 实验材料与方法第42-61页
   ·实验材料第42-43页
     ·细胞系及培养液第42页
     ·大肠杆菌菌株及酵母株第42页
     ·酵母双杂交系统第42页
     ·表达载体第42页
     ·主要试剂、抗体以及试剂盒第42-43页
     ·其它第43页
   ·实验方法第43-61页
     ·Total RNA 的提取第43-44页
     ·RT-PCR第44页
     ·琼脂糖凝胶电泳第44-45页
     ·回收DNA 片段第45页
     ·PCR第45-46页
     ·酶切第46页
     ·连接第46-47页
     ·制备大肠杆菌感受态细胞第47页
     ·转化第47页
     ·抽提质粒检测构建状况第47-48页
     ·酵母小规模转化第48-49页
     ·提取酵母蛋白第49页
     ·SDS-PAGE 电泳第49-50页
     ·Western Blotting第50-51页
     ·酵母自激活的检测第51页
     ·大规模转化第51-52页
     ·液氮变蓝实验第52页
     ·抽提酵母质粒第52页
     ·电转化大肠杆菌第52-53页
     ·蛋白诱导及纯化第53-54页
     ·考马斯亮蓝染色第54页
     ·细胞培养第54-55页
     ·免疫共沉淀第55页
     ·免疫荧光(专用于细胞骨架染色)第55-56页
     ·细胞核质组分分离第56页
     ·微管分离实验第56-57页
     ·体外微管提纯实验(两个循环的解聚聚合)第57-58页
     ·体内微管及微观结合蛋白的提取第58页
     ·体外微管聚合实验第58-59页
     ·Steady-state ATPase 酶活检测第59页
     ·活细胞实时摄影第59-61页
参考文献第61-64页
致谢第64-66页
在读期间发表的学术论文第66页

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