| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| ·Nanog 基因概述 | 第13-15页 |
| ·Nanog 基因的发现 | 第13页 |
| ·Nanog 基因结构 | 第13-14页 |
| ·Nanog 基因的时空表达 | 第14-15页 |
| ·Nanog 基因与ES 细胞中自我更新和多能性的维持 | 第15-19页 |
| ·Nanog 在ES 细胞和胚胎中作用 | 第15-16页 |
| ·Nanog 与内源信号通路调控 | 第16-17页 |
| ·Nanog 与转录因子的关系 | 第17-19页 |
| ·Nanog 与诱导多能性细胞建立 | 第19-24页 |
| ·Oct4,Sox2,C-myc 以及Klf4 引发的重编程机制 | 第19-20页 |
| ·Nanog 与Oct4，Sox2 的关系 | 第20-21页 |
| ·Nanog 与C-myc，Klf4 的关系 | 第21-22页 |
| ·Nanog 与Sall4 的关系 | 第22-23页 |
| ·Nanog 与体细胞核重编程 | 第23-24页 |
| ·Nanog 与胚胎发育 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-46页 |
| ·实验材料 | 第27-32页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第28页 |
| ·常用试剂及配制 | 第28-32页 |
| ·主要的生物信息学网站及分析软件 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-46页 |
| ·组织Realtime-PCR | 第32-35页 |
| ·基因克隆 | 第35-38页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第38页 |
| ·质粒提取 | 第38-39页 |
| ·真核表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞转染、筛选与鉴定 | 第40-41页 |
| ·卵母细胞培养和核移植 | 第41-42页 |
| ·早期胚胎总RNA 提取 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-69页 |
| ·Nanog 在成体组织中的表达 | 第46页 |
| ·猪Nanog 基因的克隆和真核表达载体构建表达 | 第46-50页 |
| ·猪Nanog 目的片段克隆与测序 | 第46-49页 |
| ·Nanog 真核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·Nanog 基因在猪胎儿成纤维细胞中的过表达研究 | 第50-62页 |
| ·重组真核质粒瞬时和稳定转染的猪胎儿成纤维细胞 | 第50-51页 |
| ·Realtime-PCR 检测Nanog 在猪胎儿成纤维细胞中的过表达情况 | 第51页 |
| ·Nanog 免疫荧光检测 | 第51-52页 |
| ·稳定表达Nanog 猪胎儿成纤维细胞生长曲线测定 | 第52页 |
| ·过表达Nanog 后出现干细胞集落样克隆 | 第52-56页 |
| ·猪Nanog mRNA 在成纤维细胞中瞬时表达情况 | 第56页 |
| ·Nanog 瞬时过表达后全能性相关基因检测 | 第56-57页 |
| ·Nanog 稳定过表达后全能性相关基因检测 | 第57-58页 |
| ·Nanog 瞬时过表达后信号通路相关基因检测 | 第58页 |
| ·Nanog 稳定过表达后信号通路相关基因检测 | 第58-59页 |
| ·类胚体形成和三个胚层分化标志检测 | 第59-60页 |
| ·Realtime-PCR 反应的特异性 | 第60-62页 |
| ·转基因克隆胚胎的制作 | 第62-69页 |
| ·转基因克隆胚胎的体外发育 | 第62-63页 |
| ·GFP-NANOG 融合蛋白在早期胚胎核中的和定位 | 第63-64页 |
| ·Oct4，Sox2 和Nanog 在IVF, NT, NT-Nanog 胚胎中的表达 | 第64-69页 |
| 4 讨论 | 第69-76页 |
| ·猪Nanog 基因在成体组织中的表达 | 第69页 |
| ·猪Nanog 基因的克隆 | 第69-70页 |
| ·Nanog 促进克隆形成 | 第70页 |
| ·Nanog 促进细胞增殖 | 第70-71页 |
| ·Nanog 与转录因子调控网络 | 第71-73页 |
| ·Nanog 与内源信号通路 | 第73页 |
| ·Nanog 与成纤维细胞核重编程 | 第73-75页 |
| ·Nanog 与核移植胚胎发育能力 | 第75-76页 |
| 5 结论 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 攻读博士期间已发表论文 | 第87页 |
