| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-38页 |
| ·转基因载体的分类和特征 | 第15-19页 |
| ·质粒载体 | 第15-17页 |
| ·真核病毒载体 | 第17-19页 |
| ·转座子的分类和研究进展 | 第19-24页 |
| ·DNA 转座子 | 第20-21页 |
| ·常见的DNA 转座子种类 | 第21-23页 |
| ·RNA 转座子 | 第23-24页 |
| ·PiggyBac 转座子研究进展 | 第24-29页 |
| ·PiggyBac 转座子的结构 | 第25页 |
| ·PiggyBac 转座子的转座机制 | 第25-27页 |
| ·PiggyBac 转座子的应用 | 第27-29页 |
| ·甲基化修饰降低piggyBac 的转座效率 | 第29页 |
| ·绿色荧光蛋白研究进展 | 第29-32页 |
| ·绿色荧光蛋白结构和发光原理 | 第29-30页 |
| ·绿色荧光蛋白在生物技术中的应用 | 第30-32页 |
| ·Follistatin 的结构和功能 | 第32-37页 |
| ·Follistatin 的结构 | 第32-34页 |
| ·Follistatin 的生物学作用 | 第34-37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-53页 |
| ·实验材料 | 第38-41页 |
| ·实验动物和质粒 | 第38页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·主要生物学分析软件 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-52页 |
| ·猪成纤维细胞的分离培养 | 第41页 |
| ·载体的构建 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞制备和转化 | 第42-43页 |
| ·质粒提取 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第44页 |
| ·DNA 和RNA 提取以及cDNA 获得 | 第44-45页 |
| ·基因组步移 | 第45-46页 |
| ·CCK8 检测 | 第46-47页 |
| ·Southern blot | 第47-49页 |
| ·亚硫酸氢盐测序 | 第49-50页 |
| ·RealTime PCR | 第50-51页 |
| ·卵母细胞培养和核移植 | 第51-52页 |
| ·流式细胞术 | 第52页 |
| ·主要的生物信息学网站 | 第52-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-75页 |
| ·PiggBac 转座子二元载体构建 | 第53-57页 |
| ·PiggyBac 转座子供体质粒构建结果 | 第53-55页 |
| ·PiggyBac 转座子辅助质粒构建结果 | 第55-57页 |
| ·PiggyBac 转座子载体转染细胞结果 | 第57-59页 |
| ·PiggyBac 转座子二元载体不影响质粒的跨膜 | 第57-58页 |
| ·PiggyBac 转座子的稳定转染效率高于随机整合体系 | 第58-59页 |
| ·PiggyBac 转座子在猪基因组上的转座特征 | 第59-65页 |
| ·外源基因稳定整合到猪基因组上 | 第59-60页 |
| ·PiggyBac 转座子插入TTAA 四核苷酸位点 | 第60-62页 |
| ·PiggyBac 转座子在基因组上多拷贝整合 | 第62-64页 |
| ·PiggyBac 转座不影响核移植胚胎的发育 | 第64-65页 |
| ·PiggyBac 转座子在细胞和胚胎中高效介导外源基因的表达 | 第65-66页 |
| ·PiggyBac 转座子介导EGFP mRNA 高效表达 | 第65页 |
| ·PiggyBac 转座子介导EGFP 蛋白的高效表达 | 第65-66页 |
| ·外源基因启动子的甲基化和外源基因表达量无关 | 第66-67页 |
| ·PiggyBac 转座酶的量影响转染和细胞增殖 | 第67-69页 |
| ·PiggyBac 转座酶的量对细胞转染的影响 | 第67-69页 |
| ·PiggyBac 转座酶的量对细胞增殖的影响 | 第69页 |
| ·PiggyBac 转座子介导Follistatin 在PFF 中的表达 | 第69-75页 |
| ·携带猪Follistatin 的piggyBac 转座子供体质粒构建 | 第69-70页 |
| ·细胞转染和筛选 | 第70-71页 |
| ·供体质粒过量导致随机整合现象 | 第71-72页 |
| ·Follistatin 的表达引起猪胎儿成纤维细胞中p53 和desmin 的表达变化 | 第72-75页 |
| 4 讨论 | 第75-81页 |
| ·质粒跨膜和转基因效率提高 | 第75-76页 |
| ·PiggyBac 转座的分子特征 | 第76-78页 |
| ·PiggyBac 转座子插入TTAA 四核苷酸位点 | 第76页 |
| ·PiggyBac 转座子在猪基因组上的多拷贝插入 | 第76-77页 |
| ·研究转座子插入位点的方法 | 第77-78页 |
| ·外源基因表达 | 第78-79页 |
| ·外源基因在猪胎儿成纤维细胞中的表达 | 第78页 |
| ·外源基因在猪核移植胚胎中的表达 | 第78-79页 |
| ·PiggyBac 转座酶对细胞的毒性 | 第79-80页 |
| ·PiggyBac 转座子的过表达抑制现象 | 第79页 |
| ·PiggyBac 转座酶对细胞增殖的影响 | 第79-80页 |
| ·Follistatin 在猪胎儿成纤维细胞中的表达 | 第80-81页 |
| ·Follistatin 使成纤维细胞出现向成肌细胞分化的趋势 | 第80页 |
| ·p53 在 follistatin 表达的成纤维细胞中维护细胞内的平衡 | 第80-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 攻读研究生期间发表的论文 | 第94页 |
