| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2 仪器、试剂、材料与方法 | 第13-25页 |
| 2.1 主要材料和试剂 | 第13-14页 |
| 2.2 主要仪器 | 第14-15页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第15-18页 |
| 2.4 基因重组 | 第18-19页 |
| 2.4.1 提取样品DNA片段 | 第18页 |
| 2.4.2 PCR扩增目的基因片段 | 第18页 |
| 2.4.3 PCR产物纯化 | 第18页 |
| 2.4.4 酶切纯化 | 第18页 |
| 2.4.5 感受态细胞DH-5α的制备 | 第18-19页 |
| 2.4.6 连接转化,挑单克隆 | 第19页 |
| 2.4.7 质粒的提取 | 第19页 |
| 2.5 细胞培养方面的技术 | 第19-20页 |
| 2.5.1 细胞的传代与冻存 | 第19-20页 |
| 2.5.2 细胞中加入TNF-α(Sigma),刺激细胞反应 | 第20页 |
| 2.6 细胞中RNA的提取,反转录获取目的基因cDNA | 第20页 |
| 2.7 PCR检测目的基因mRNA表达水平 | 第20-21页 |
| 2.8 免疫印迹实验(Westernblot) | 第21-22页 |
| 2.9 KLF4腺病毒的扩增及细胞感染 | 第22页 |
| 2.10 细胞免疫荧光实验 | 第22-23页 |
| 2.11 细胞转染及报告基因分析 | 第23页 |
| 2.12 GKLFsiRNA转染进细胞敲低细胞中的KLF4因子 | 第23页 |
| 2.13 密度扫描分析 | 第23-24页 |
| 2.14 统计学处理 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-37页 |
| 3.1 APJ基因的转录水平随TNF-α的时间和浓度依赖方式下降 | 第25-26页 |
| 3.2 APJ蛋白表达量随TNF-α的时间和浓度依赖方式下降 | 第26-27页 |
| 3.3 KLF4基因的转录水平随TNF-α的时间和浓度依赖方式上升 | 第27-28页 |
| 3.4 KLF4蛋白表达量随TNF-α的时间和浓度依赖方式上升 | 第28-29页 |
| 3.5 细胞免疫荧光实验显示LX-2细胞给予TNF-α的刺激以后,APJ的荧光强度是降低的,而KLF4的荧光强度是增加的 | 第29-31页 |
| 3.6 核转录因子KLF4和APJ基因启动子上GKLF位点序列结合,负调控APJ基因的转录活性 | 第31-32页 |
| 3.7 细胞中KLF4因子的过表达,使APJ基因的转录水平降低 | 第32-33页 |
| 3.8 细胞中KLF4因子的过表达,使APJ基因的蛋白表达水平降低 | 第33-34页 |
| 3.9 细胞中KLF4因子被GKLFsiRNA敲低后,APJ基因的转录水平是升高的 | 第34-35页 |
| 3.10 细胞中KLF4因子被GKLFsiRNA敲低后,APJ的蛋白表达水平是升高的 | 第35-36页 |
| 3.11 LX-2细胞中加入TNF-α以后p-ERK通路的作用是减弱的,ERK信号通路被抑制以后APJ的表达量升高 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-43页 |
| 5 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 综述 | 第49-65页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 在读期间发表的学术论文与奖励 | 第67-68页 |
