| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 1,2,4-丁三醇的性质及用途 | 第11-12页 |
| 1.1.1 1,2,4-丁三醇的性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 1,2,4-丁三醇的用途 | 第12页 |
| 1.2 1,2,4-丁三醇的生产方法 | 第12-15页 |
| 1.2.1 化学法生产1,2,4-丁三醇 | 第12-13页 |
| 1.2.2 生物法生产1,2,4-丁三醇 | 第13-15页 |
| 1.3 微生物发酵生产1,2,4-丁三醇的研究现状 | 第15-18页 |
| 1.3.1 发酵产1,2,4-丁三醇的菌种 | 第15页 |
| 1.3.2 发酵产1,2,4-丁三醇的途径 | 第15-16页 |
| 1.3.3 发酵产1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建 | 第16-18页 |
| 1.4 基因敲除技术概况 | 第18-20页 |
| 1.5 本课题研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 1.5.1 本课题研究的目的 | 第20-21页 |
| 1.5.2 本课题研究的意义 | 第21页 |
| 1.6 本研究的主要技术路线 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-52页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-52页 |
| 2.2.1 P.putida CICC21884和Bacillus subtilis168细菌基因组的提取 | 第31页 |
| 2.2.2 mdlC基因和gdh基因的克隆及测序 | 第31-35页 |
| 2.2.3 表达质粒pSLQMG的构建 | 第35-41页 |
| 2.2.4 表达质粒pSLQMG转化表达宿主细胞及工程菌株的筛选与鉴定 | 第41页 |
| 2.2.5 大肠杆菌工程菌株中苯甲酰甲酸脱羧酶和木糖脱氢酶酶活测定 | 第41-45页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE检测诱导表达蛋白苯甲酰甲酸脱羧酶和木糖脱氢酶 | 第45页 |
| 2.2.7 重组菌株SLQMG2和SLQMG3的分批发酵试验 | 第45-46页 |
| 2.2.8 xylAB基因敲除突变株的构建 | 第46-51页 |
| 2.2.9 重组质粒pSLQMG转化大肠杆菌突变株ΔxylAB | 第51页 |
| 2.2.10 重组菌SLQMG4的木糖摇瓶发酵和HPLC检测 | 第51-52页 |
| 第3章 结果与分析 | 第52-70页 |
| 3.1 P.putida CICC21884基因组的提取 | 第52页 |
| 3.2 Bacillus subtilis168基因组的提取 | 第52-53页 |
| 3.3 mdlC基因的克隆和测序 | 第53-54页 |
| 3.3.1 mdlC基因的克隆 | 第53页 |
| 3.3.2 mdlC基因的测序结果与同源性分析 | 第53-54页 |
| 3.4 gdh基因的克隆和测序 | 第54-55页 |
| 3.4.1 gdh基因的克隆 | 第54页 |
| 3.4.2 gdh基因的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.3 gdh基因的测序结果与同源性分析 | 第55页 |
| 3.5 重组表达质粒pSLQM的构建 | 第55-57页 |
| 3.5.1 质粒pRSFDuet-1和pSLQTM的双酶切结果 | 第55-56页 |
| 3.5.2 重组质粒pSLQM阳性转化子的筛选与鉴定 | 第56-57页 |
| 3.6 重组表达质粒pSLQMG的构建 | 第57-59页 |
| 3.7 重组大肠杆菌SLQMG2和SLQMG3的筛选鉴 | 第59-60页 |
| 3.8 重组菌酶活测定 | 第60-62页 |
| 3.8.1 考马斯亮蓝测定总蛋白质浓度结果 | 第60-61页 |
| 3.8.2 苯甲酰甲酸脱羧酶酶活测定结果及诱导表达优化 | 第61页 |
| 3.8.3 葡萄糖脱氢酶酶活测定结果及诱导表达优化 | 第61-62页 |
| 3.9 目的蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第62-63页 |
| 3.10 HPLC检测重组大肠杆菌发酵结果 | 第63-65页 |
| 3.10.1 各标准品标准曲线的绘制 | 第63-64页 |
| 3.10.2 重组菌SLQMG3利用木糖的摇瓶发酵 | 第64-65页 |
| 3.11 基因敲除突变株的构建 | 第65-69页 |
| 3.11.1 线性打靶DNA片段的克隆 | 第65-66页 |
| 3.11.2 xylAB基因敲除突变株的筛选与鉴定 | 第66-68页 |
| 3.11.3 氯霉素抗性片段的去除 | 第68-69页 |
| 3.12 突变重组菌SLQMG4的筛选鉴定 | 第69页 |
| 3.13 SLQMG4突变株利用木糖的摇瓶发酵 | 第69-70页 |
| 第4章 讨论 | 第70-75页 |
| 4.1 产1,2,4-丁三醇菌株的选择 | 第70页 |
| 4.2 1,2,4-丁三醇产率的影响因素 | 第70-72页 |
| 4.3 表达载体的选择 | 第72-73页 |
| 4.4 影响基因敲除效率的因素 | 第73-74页 |
| 4.5 后续工作设想 | 第74-75页 |
| 第5章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第89-90页 |
