| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型研究进展 | 第17-57页 |
| 1 病原学 | 第17-21页 |
| 1.1 病毒的发现 | 第17-18页 |
| 1.2 理化性质 | 第18页 |
| 1.3 基因结构和编码蛋白 | 第18-21页 |
| 2 病毒转录和DNA的复制 | 第21-25页 |
| 2.1 病毒感染 | 第21页 |
| 2.2 病毒转录 | 第21-22页 |
| 2.3 病毒复制 | 第22-25页 |
| 3 PCV2流行病学与基因分型 | 第25-26页 |
| 3.1 PCV2流行病学 | 第25页 |
| 3.2 PCV2基因分型 | 第25-26页 |
| 4 PCV2临床症状与诊断 | 第26-29页 |
| 4.1 PCV2的亚临床感染 | 第26-27页 |
| 4.2 PCV2的临床感染症状 | 第27-28页 |
| 4.3 PCV2的临床病理及诊断 | 第28-29页 |
| 5 PCV2感染与细胞因子的关系 | 第29页 |
| 6 PCV2基因组与宿主产生的效应 | 第29-30页 |
| 7 PCV2对细胞内信号转导通路的作用 | 第30页 |
| 8 PCV2与宿主蛋白的研究进展 | 第30-32页 |
| 9 PCV2感染后的免疫应答水平 | 第32-33页 |
| 10 PCV2疫苗研究现状 | 第33-38页 |
| 10.1 试验PCV2疫苗 | 第33-34页 |
| 10.2 商品化PCV2疫苗 | 第34-35页 |
| 10.3 疫苗引起免疫保护的机制 | 第35页 |
| 10.4 PCV2疫苗的免疫现状 | 第35-38页 |
| 参考文献 | 第38-57页 |
| 第二章 血清淀粉样蛋白P成分在猪圆环病毒2型复制中的作用 | 第57-89页 |
| 1 材料与方法 | 第58-69页 |
| 1.1 主要试剂和生物材料 | 第58页 |
| 1.2 免疫沉淀及质谱分析筛选与Cap蛋白互作的宿主蛋白 | 第58-59页 |
| 1.3 引物设计和质粒构建 | 第59-63页 |
| 1.4 质粒表达 | 第63-64页 |
| 1.5 Western Blotting | 第64页 |
| 1.6 Sap实时荧光定量Real-time方法的建立与应用 | 第64-65页 |
| 1.7 Sap对PCV2的作用 | 第65页 |
| 1.8 共聚焦 | 第65页 |
| 1.9 免疫共沉淀 | 第65-66页 |
| 1.10 IFA鉴定 | 第66页 |
| 1.11 可溶性Sap蛋白功能鉴定 | 第66页 |
| 1.12 Sap截断体质粒的构建、表达及功能 | 第66-67页 |
| 1.13 Sap点突变体的构建与功能鉴定 | 第67-69页 |
| 1.14 数据分析 | 第69页 |
| 2 结果 | 第69-81页 |
| 2.1 免疫沉淀及质谱分析筛选与Cap蛋白互作的宿主蛋白 | 第69-70页 |
| 2.2 免疫共沉淀鉴定Sap与Cap蛋白互作 | 第70页 |
| 2.3 Sap基因表达质粒构建与鉴定 | 第70-72页 |
| 2.4 Sap荧光定量测定方法的建立 | 第72-73页 |
| 2.5 Sap蛋白抑制PCV2复制 | 第73-74页 |
| 2.6 Sap蛋白与PCV2 Cap共定位 | 第74-75页 |
| 2.7 可溶性Sap蛋白在体外抑制PCV2复制 | 第75-76页 |
| 2.8 Sap截断体质粒的构建、表达及功能域鉴定 | 第76-78页 |
| 2.9 Sap突变体质粒的构建、表达及功能鉴定 | 第78-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 第三章 SOCS3在猪圆环病毒2型亚临床感染中的作用 | 第89-115页 |
| 1 材料与方法 | 第90-97页 |
| 1.1 主要试剂和生物材料 | 第90页 |
| 1.2 动物实验设计 | 第90页 |
| 1.3 PBMC的分离与处理 | 第90-91页 |
| 1.4 实时荧光定量Real-time PCR | 第91页 |
| 1.5 Western Blotting | 第91-92页 |
| 1.6 引物设计和质粒构建 | 第92-95页 |
| 1.7 NF-κB信号通路激活的测定 | 第95页 |
| 1.8 PCV2感染PK-15后对SOCS3表达的影响 | 第95页 |
| 1.9 炎性细胞因子对PCV2的影响 | 第95-96页 |
| 1.10 SOCS3对PCV2在PK-15细胞上的作用 | 第96页 |
| 1.11 SOCS3干扰后对PCV2引起的促炎性因子的影响 | 第96页 |
| 1.12 共聚焦 | 第96-97页 |
| 1.13 免疫共沉淀 | 第97页 |
| 1.14 数据分析 | 第97页 |
| 2 结果 | 第97-107页 |
| 2.1 PCV2亚临床感染及PMWS猪PBMCs中SOCS3及炎性因子表达水平 | 第97-99页 |
| 2.2 PCV2亚临床感染仔猪的PBMCs中促炎性因子信号通路受抑制 | 第99-100页 |
| 2.3 SOCS3、STAT3和TRAF2基因重组质粒构建与表达 | 第100-102页 |
| 2.4 PCV2诱导PK-15细胞中SOCS3的表达 | 第102-103页 |
| 2.5 SOCS3促进PCV2在PK-15细胞中复制 | 第103-104页 |
| 2.6 促炎性因子抑制PCV2的复制 | 第104页 |
| 2.7 SOCS3沉默帮助PCV2上调IL-6和TNF-α | 第104页 |
| 2.8 SOCS3在体外抑制TNF-α和IL-6诱导的NF-κB信号通路 | 第104-105页 |
| 2.9 SOCS3与STAT3、TRAF2共定位 | 第105-106页 |
| 2.10 SOCS3与STAT3、TRAF2免疫共沉淀 | 第106-107页 |
| 3 讨论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 第四章 Gp96N对猪圆环病毒2型Cap蛋白的免疫增强作用 | 第115-135页 |
| 1 材料与方法 | 第116-121页 |
| 1.1 主要试剂和生物材料 | 第116页 |
| 1.2 重组杆状病毒鉴定 | 第116-117页 |
| 1.3 仔猪免疫保护及攻毒保护实验设计 | 第117-118页 |
| 1.4 PCV2 ELISA抗体检测 | 第118页 |
| 1.5 PCV2中和抗体检测 | 第118-119页 |
| 1.6 PBMC分离 | 第119页 |
| 1.7 淋巴细胞增殖试验 | 第119页 |
| 1.8 细胞因子测定 | 第119页 |
| 1.9 病毒载量的检测 | 第119-120页 |
| 1.10 临床症状及病理学观察 | 第120-121页 |
| 1.11 数据分析 | 第121页 |
| 2 结果 | 第121-127页 |
| 2.1 重组病毒Western blotting鉴定 | 第121页 |
| 2.2 ELISA抗体效价检测 | 第121-122页 |
| 2.3 中和抗体效价检测 | 第122-123页 |
| 2.4 淋巴细胞增殖检测 | 第123页 |
| 2.5 细胞因子检测 | 第123-124页 |
| 2.6 临床症状 | 第124-125页 |
| 2.7 病毒载量检测 | 第125-126页 |
| 2.8 病理变化 | 第126页 |
| 2.9 IHC检测 | 第126-127页 |
| 3 讨论 | 第127-130页 |
| 参考文献 | 第130-135页 |
| 第五章 白介素21对猪圆环病毒2型Cap蛋白的免疫增强作用 | 第135-155页 |
| 1 材料与方法 | 第136-144页 |
| 1.1 主要试剂和生物材料 | 第136页 |
| 1.2 重组杆状病毒表达质粒的构建 | 第136-139页 |
| 1.3 重组Bacmid的构建与鉴定 | 第139-140页 |
| 1.4 重组杆状病毒的获得 | 第140-141页 |
| 1.5 免疫原的制备 | 第141页 |
| 1.6 小鼠免疫试验设计 | 第141-142页 |
| 1.7 体液免疫 | 第142-143页 |
| 1.8 细胞免疫 | 第143页 |
| 1.9 病毒载量的检测 | 第143-144页 |
| 1.10 数据分析 | 第144页 |
| 2 结果 | 第144-150页 |
| 2.1 目的基因扩增 | 第144页 |
| 2.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第144-145页 |
| 2.3 重组Bacmids鉴定 | 第145页 |
| 2.4 重组杆状病毒的鉴定 | 第145-146页 |
| 2.5 ELISA抗体 | 第146-147页 |
| 2.6 中和抗体效价测定 | 第147-148页 |
| 2.7 淋巴细胞增殖实验 | 第148页 |
| 2.8 IFN-γ和IL-4的检测 | 第148-149页 |
| 2.9 病毒血症检测 | 第149-150页 |
| 3 讨论 | 第150-153页 |
| 参考文献 | 第153-155页 |
| 第六章 穿膜肽和蜜蜂蜂毒分泌信号肽对杆状病毒表达PCV2 Cap蛋白的影响 | 第155-171页 |
| 1 材料与方法 | 第156-160页 |
| 1.1 主要试剂与材料 | 第156页 |
| 1.2 重组杆状病毒表达质粒的构建 | 第156-159页 |
| 1.3 重组Bacmid的构建与鉴定 | 第159页 |
| 1.4 重组杆状病毒的获得 | 第159页 |
| 1.5 病毒样颗粒的形成 | 第159-160页 |
| 2 结果 | 第160-163页 |
| 2.1 目的片段扩增 | 第160页 |
| 2.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第160-161页 |
| 2.3 重组Bacmids鉴定 | 第161页 |
| 2.4 重组杆状病毒的鉴定 | 第161-162页 |
| 2.5 电镜观察 | 第162-163页 |
| 3 讨论 | 第163-165页 |
| 参考文献 | 第165-171页 |
| 第七章 PCV2a和PCV2b鉴别PCR检测方法的建立与应用 | 第171-183页 |
| 1 材料与方法 | 第172-174页 |
| 1.1 主要试剂和生物材料 | 第172页 |
| 1.2 引物设计 | 第172-173页 |
| 1.3 检测样品 | 第173页 |
| 1.4 病毒DNA提取 | 第173页 |
| 1.5 PCR检测PCV2a和PCV2b | 第173页 |
| 1.6 基因克隆与序列分析 | 第173页 |
| 1.7 PCR特异性 | 第173页 |
| 1.8 PCR敏感性 | 第173-174页 |
| 1.9 鉴别PCR的应用 | 第174页 |
| 1.10 病毒分离与鉴定 | 第174页 |
| 2 结果 | 第174-178页 |
| 2.1 PCV2a和PCV2b鉴别PCR的建立 | 第174-175页 |
| 2.2 特异性试验 | 第175页 |
| 2.3 敏感性试验 | 第175-176页 |
| 2.4 鉴别PCR方法的应用 | 第176-177页 |
| 2.5 与病原分离鉴定符合率比较 | 第177-178页 |
| 3 讨论 | 第178-179页 |
| 参考文献 | 第179-183页 |
| 全文总结 | 第183-185页 |
| 全文创新点 | 第185-187页 |
| 致谢 | 第187-189页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第189页 |
