| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略词 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1. 植物花药和花粉发育 | 第11-15页 |
| 1.1 植物花药发育的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2 花粉发育分子机理 | 第14-15页 |
| 2. 水稻雄性不育基因PTC1的研究进展 | 第15-19页 |
| 3. 拟南芥中与目标候选基因相同源的RFI2基因的研究进展 | 第19-22页 |
| 4. OsEMF2b基因的研究进展 | 第22-23页 |
| 5. 蛋白质相互作用检测方法 | 第23-26页 |
| 5.1 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) | 第24页 |
| 5.2 PULL-DOWN技术 | 第24页 |
| 5.3 噬菌体展示技术(Phage On Display) | 第24-25页 |
| 5.4 生物发光共振能量转移技术(Biobuminescence Resonance EnergyTransfer,BRET) | 第25页 |
| 5.5 双分子荧光互补技术(Bimolecular Fluorescence Complementation,BiFC) | 第25-26页 |
| 5.6 酵母双杂交系统(Yeast Two Hybrid System) | 第26页 |
| 6. 酵母双杂交的原理 | 第26-27页 |
| 6.1 酵母双杂交系统的类型 | 第26-27页 |
| 7. 酵母双杂交系统的应用 | 第27页 |
| 8. 研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-43页 |
| 1. 实验材料 | 第29-31页 |
| 1.1 植物和文库材料 | 第29页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第29页 |
| 1.3 主要酶、试剂及试剂盒 | 第29-30页 |
| 1.4 引物合成及测序 | 第30页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2. 实验方法与步骤 | 第31-35页 |
| 2.1 主要实验流程如下 | 第31-32页 |
| 2.2 pGBKT7-Bait/pGADT7-Aait质粒构建 | 第32-34页 |
| 2.3 连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第34-35页 |
| 3. MS92互作蛋白的筛选 | 第35-37页 |
| 3.1 文库菌的扩大 | 第35页 |
| 3.2 质粒的中量提取 | 第35-36页 |
| 3.3 酵母菌株Y2HGOLD的活化 | 第36页 |
| 3.4 酵母菌株Y2HGOLD感受态的制备 | 第36-37页 |
| 4. Bait质粒的自激活检测与质粒的毒性检测 | 第37-41页 |
| 4.1 Bait质粒和文库质粒大规模共转化Y2HGOLD酵母菌株 | 第37-38页 |
| 4.2 初筛 | 第38页 |
| 4.3 第二次筛选 | 第38页 |
| 4.4 第三、四次筛选 | 第38页 |
| 4.5 候选阳性克隆质粒分离纯化与获得 | 第38-39页 |
| 4.6 分离只含一种Prey质粒的候选阳性克隆 | 第39页 |
| 4.7 酵母质粒的提取 | 第39-40页 |
| 4.8 候选阳性质粒转化大肠杆菌DH5α与鉴定 | 第40-41页 |
| 5. Technovit 7100树脂切片的实验过程 | 第41-42页 |
| 6. 花粉育性鉴定的方法 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-59页 |
| 1. 酵母双杂筛选 | 第43-47页 |
| 1.1 MS92-CDS片段的克隆及Bait载体构建 | 第43页 |
| 1.2 Bait质粒的自激活检测与质粒的毒性检测 | 第43-44页 |
| 1.3 MS92互作蛋白的筛选和分离单一质粒 | 第44-47页 |
| 2. 测序结果序列分析 | 第47-51页 |
| 2.1 阳性单克隆的测序分析 | 第47-49页 |
| 2.2 候选蛋白的表达谱分析 | 第49-51页 |
| 3. 候选阳性蛋白与MS92的互作验证 | 第51-55页 |
| 3.1 候选阳性蛋白的基因编码区扩增 | 第51页 |
| 3.2 候选基因与MS92连接后重组质粒的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3 重组质粒的双酶切检测 | 第52-53页 |
| 3.4 候选蛋白自激活检测 | 第53页 |
| 3.5 候选蛋白LOC_Os09g33670和MS92(1.7K)互作验证 | 第53-54页 |
| 3.6 候选蛋白OsEMF2b(LOC_Os09g13630)与MS92的互作验证 | 第54-55页 |
| 4. 候选基因的T-DNA突变体材料 | 第55-59页 |
| 4.1 候选基因LOC_Os09g33670的T-DNA突变体材料 | 第55-56页 |
| 4.2 osemf2b的T-DNA突变体 | 第56-57页 |
| 4.3 osemf2b突变体的半薄切片 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-62页 |
| 1. 酵母双杂交的筛选 | 第59页 |
| 2. 对候选阳性基因的分析 | 第59-60页 |
| 2.1 候选基因LOC_Os09g33670的分析 | 第59-60页 |
| 2.2 LOC_Os09g33670的T-DNA插入突变体的分析 | 第60页 |
| 3. OsEMF2b(LOC_Os09g13630)与MS92的互作验证 | 第60-62页 |
| 3.1 候选基因 OsEMF2b(LOC_Os09g13630)的分析 | 第60-61页 |
| 3.2 osemf2b突变体的分析 | 第61-62页 |
| 第五章 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70页 |
