| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一部分 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 BT毒素的结构与分类 | 第11-13页 |
| 1.2 BT毒素受体及其分类 | 第13-17页 |
| 1.2.1 目前已知的昆虫中肠Bt毒素受体及其分类 | 第14-16页 |
| 1.2.2 近年来新发现的昆虫中肠Bt毒素受体——ABC家族蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3 受体与Bt毒素蛋白之间的相互作用 | 第17-18页 |
| 1.4 昆虫对Bt毒素的抗性机制 | 第18-20页 |
| 1.5 Bt毒素毒力测定的方法及应用昆虫离体培养细胞系研究Bt毒素的作用机制 | 第20-21页 |
| 1.6 课题研究的意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验材料 | 第22-30页 |
| 2.1 细胞培养及细胞系 | 第22页 |
| 2.2 菌种及质粒 | 第22页 |
| 2.3 本实验中使用的引物 | 第22-23页 |
| 2.4 实验仪器及型号 | 第23-24页 |
| 2.5 实验试剂及药品 | 第24-25页 |
| 2.6 培养基及溶液的配制 | 第25-30页 |
| 2.6.1 DNA凝胶电泳相关的溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.6.2 蛋白质凝胶电泳相关的溶液配制 | 第26页 |
| 2.6.3 SDS-PAGE凝胶的配制 | 第26-27页 |
| 2.6.4 Western Blot(免疫印迹)相关溶液 | 第27页 |
| 2.6.5 细胞培养基 | 第27-28页 |
| 2.6.6 细菌培养基 | 第28页 |
| 2.6.7 常用溶液的配方 | 第28-30页 |
| 第三部分 实验方法与步骤 | 第30-43页 |
| 3.1 氯化锂法提质粒 | 第30页 |
| 3.2 OMEGA试剂盒提质粒 | 第30-31页 |
| 3.3 OMEGA试剂盒回收PCR产物 | 第31页 |
| 3.4 dsRNA的体外合成 | 第31-35页 |
| 3.5 TH细胞中SlABCC3基因表达的敲降 | 第35-36页 |
| 3.5.1 dsRNA的转染 | 第35页 |
| 3.5.2 RNAi后TH细胞对Cry1Ac毒素的敏感性分析 | 第35-36页 |
| 3.6 细胞RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.7 cDNA的合成 | 第37页 |
| 3.8 荧光定量PCR技术分析RNAi后基因相对表达水平 | 第37-38页 |
| 3.9 重组质粒转染细胞 | 第38-39页 |
| 3.10 分析SlABCC3蛋白介导的Cry1Ac毒素的毒力 | 第39页 |
| 3.11 分析SlABCC3蛋白和棉铃虫HaCadherein蛋白共表达介导的Cry1Ac毒素的毒力 | 第39-40页 |
| 3.12 几种不同鳞翅目昆虫ABCC2和ABCC3基因的氨基酸序列同源性分析 | 第40页 |
| 3.13 棉铃虫重组表达的HaABCC2蛋白的Werstern-blot分析 | 第40-41页 |
| 3.13.1 细胞总蛋白样品制备 | 第40页 |
| 3.13.2 SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白 | 第40-41页 |
| 3.13.3 Western blot技术检测HaABCC2蛋白 | 第41页 |
| 3.14 ABCC2和ABCC3蛋白的亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 3.15 分析ABCC2和ABCC3蛋白介导的Cry1Ac毒素的毒力 | 第42-43页 |
| 第四部分 实验结果 | 第43-61页 |
| 4.1 SlABCC3和GFP基因的dsRNA的合成 | 第43页 |
| 4.2 定量PCR分析干扰后的TH细胞SlABCC3基因相对表达量 | 第43-46页 |
| 4.2.1 半定量PCR分析干扰后SlABCC3基因mRNA的含量 | 第43-44页 |
| 4.2.2 荧光定量PCR产物特异性分析 | 第44-45页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR分析干扰后SlABCC3基因mRNA的含量 | 第45-46页 |
| 4.2.4 SlABCC3基因的干扰对其他SlABCC基因mRNA含量的影响 | 第46页 |
| 4.3 干扰SlABCC3基因降低了TH细胞对Cry1Ac毒素的敏感性 | 第46-47页 |
| 4.4 MIT法检测干扰SlABCC3基因后TH细胞对Cy1Ac毒素的敏感性 | 第47-49页 |
| 4.5 SlABCC3蛋白超表达增强了细胞对Cry1Ac毒素的敏感性 | 第49-52页 |
| 4.5.1 SlABCC3蛋白超表达增强了TH细胞对Cry1Ac毒素的敏感性 | 第49-50页 |
| 4.5.2 SlABCC3蛋白超表达增强了TnH_5细胞对Cry1Ac毒素的敏感性 | 第50-51页 |
| 4.5.3 HaCadherin蛋白超表达增强了TnH_5细胞对Cry1Ac毒素的敏感性 | 第51页 |
| 4.5.4 比较SlABCC3蛋白和HaCadherin蛋白介导Cry1Ac毒素的毒力 | 第51-52页 |
| 4.6 SlABCC3和HaCadherin共表达介导的Cry1Ac毒力增强 | 第52-55页 |
| 4.6.1 SlABCC3和HaCadherin共表达介导的Cry1Ac毒力的显微镜观察 | 第52-54页 |
| 4.6.2 MTT法比较SlABCC3和HaCadherin共表达介导的Cry1Ac毒力 | 第54-55页 |
| 4.7 几种不同鳞翅目昆虫ABCC2和ABCC3基因的氨基酸序列同源性分析 | 第55-56页 |
| 4.8 ABCC2和ABCC3蛋白的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 4.9 棉铃虫重组表达的HaABCC2蛋白的Western-blot分析 | 第57-58页 |
| 4.10 分析不同鳞翅目昆虫ABCC2和ABCC3蛋白介导Cry1Ac毒素的毒力 | 第58-61页 |
| 第五部分 讨论 | 第61-64页 |
| 5.1 SlABCC3蛋白介导的Cry1Ac毒素毒力的研究 | 第61-63页 |
| 5.1.1 SlABCC3是TH细胞的一种内源性Cry1Ac毒素受体 | 第61-62页 |
| 5.1.2 SlABCC3蛋白与棉铃虫HaCadherin蛋白共表达具有毒力增效作用 | 第62-63页 |
| 5.2 不同鳞翅目昆虫的ABCC2和ABCC3蛋白可以作为BT毒素受体 | 第63-64页 |
| 第六部分 总结与展望 | 第64-65页 |
| 6.1 总结 | 第64页 |
| 6.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 硕士期间发表论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
