| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第12页 |
| 1.2 苹果果实中的有机酸 | 第12-18页 |
| 1.2.1 果实有机酸代谢研究 | 第15-16页 |
| 1.2.2 苹果酸的转运 | 第16-17页 |
| 1.2.3 果实有机酸的分子生物学相关研究 | 第17-18页 |
| 1.3 果实重要性状的QTL研究 | 第18-21页 |
| 1.3.1 遗传连锁图谱与QTL定位 | 第18-19页 |
| 1.3.2 BSA-seq与QTL定位 | 第19-20页 |
| 1.3.3 苹果果实酸性状的QTLs研究现状及进展 | 第20-21页 |
| 1.4 分子标记在苹果遗传育种中的应用 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 酶和生化试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 常用试剂及培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 苹果果实酸性状表型测定 | 第25页 |
| 2.2.2 苹果果实酸性状表型数据分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3 苹果基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.4 QTL定位 | 第26页 |
| 2.2.5 BSA-seq | 第26-27页 |
| 2.2.6 候选基因预测 | 第27页 |
| 2.2.7 基因标记基因型分析 | 第27-28页 |
| 2.2.8 基因标记在DNA水平的相关性验证 | 第28页 |
| 2.2.9 苹果果实总RNA的提取、纯化与cDNA的合成 | 第28-30页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR (qPCR)定量检测基因表达 | 第30页 |
| 2.2.11 基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.12 PCR扩增产物的回收纯化 | 第31页 |
| 2.2.13 目的片度连接反应 | 第31页 |
| 2.2.14 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31页 |
| 2.2.15 质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.16 质粒DNA的酶切反应 | 第32页 |
| 2.2.17 表达载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.18 热激法转化农杆菌 | 第33页 |
| 2.2.19 苹果王林果实愈伤组织的培养及转化 | 第33-34页 |
| 2.2.20 蛋白原核表达、纯化及Western blot试验 | 第34-35页 |
| 2.2.21 磷酸酶活性测定 | 第35页 |
| 2.2.22 启动子活性分析 | 第35-36页 |
| 2.2.23 亚细胞定位 | 第36页 |
| 2.2.24 BiFC试验 | 第36-37页 |
| 2.2.25 酵母杂交实验 | 第37-38页 |
| 2.2.26 V-ATPase (液泡膜H+-ATPase)酶活的测定 | 第38页 |
| 2.2.27 基因组选择模型的建立 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-68页 |
| 3.1 苹果果实酸度性状表型分析 | 第40-43页 |
| 3.1.1 苹果果实pH值分析 | 第40-41页 |
| 3.1.2 苹果果实苹果酸含量分析 | 第41-42页 |
| 3.1.3 苹果果实苹果酸含量与pH值的相关性分析 | 第42-43页 |
| 3.2 苹果果实苹果酸含量的QTLs定位及候选基因分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 苹果酸含量的MapQTL和BSA-seq的定位分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 QTL位点内苹果酸性状候选基因筛选 | 第45-47页 |
| 3.3 QTLs候选基因的位点验证和功能分析 | 第47-64页 |
| 3.3.1 MdALMTII基因变异位点A/G的验证 | 第47-49页 |
| 3.3.2 MdPP2CH基因变异位点验证与功能分析 | 第49-57页 |
| 3.3.3 MdSAUR37基因变异位点验证与功能分析 | 第57-63页 |
| 3.3.4 MdMYB44基因变异位点验证 | 第63-64页 |
| 3.4 MdSAUR37、MdPP2CH、MdALMTII和MdMYB44基因型预测果实酸度表型值 | 第64-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| 4.1 苹果果实酸度性状的遗传特点 | 第68页 |
| 4.2 MapQTL和BSA-seq在QTLs定位中的应用 | 第68-69页 |
| 4.3 果实酸度QTLs定位 | 第69-70页 |
| 4.4 候选基因的预测和验证 | 第70-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 附录 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 个人简介 | 第94页 |
