| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-23页 |
| ·生物催化羰基不对称还原合成手性醇 | 第10-16页 |
| ·手性醇的应用 | 第10-11页 |
| ·手性醇的合成方法 | 第11-12页 |
| ·醛酮不对称还原生产手性醇 | 第12-16页 |
| ·生物催化羰基不对称还原的研究趋势 | 第16页 |
| ·羰基还原酶的分类及特点 | 第16-19页 |
| ·醛酮还原酶(AKR) | 第16-18页 |
| ·短链脱氢酶/还原酶(SDR) | 第18-19页 |
| ·羰基还原酶的获取方法 | 第19-21页 |
| ·催化菌株的获取 | 第19-20页 |
| ·羰基还原酶的获取 | 第20-21页 |
| ·本论文的研究意义及内容 | 第21-23页 |
| 2 链霉菌立体性还原芳香羰基化合物 | 第23-49页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·实验试剂 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·培养方法 | 第24页 |
| ·还原反应 | 第24页 |
| ·分析方法 | 第24-26页 |
| ·菌株初始培养温度和pH的确定 | 第26页 |
| ·链霉菌还原羰基化合物的时间和浓度依赖性 | 第26页 |
| ·表面活性剂和有机助溶剂对链霉菌还原羰基化合物的影响 | 第26页 |
| ·辅助底物对链霉菌还原羰基化合物的影响 | 第26页 |
| ·链霉菌转化底物能力的驯化 | 第26-27页 |
| ·实验结果 | 第27-48页 |
| ·HPLC分析及标准曲线测定 | 第27-32页 |
| ·手性GC分析 | 第32-34页 |
| ·链霉菌培养温度和pH对转化率的影响 | 第34页 |
| ·菌体还原苯乙酮和3′-氯-苯乙酮产物的鉴定 | 第34-40页 |
| ·菌体还原苯乙酮和3′-氯-苯乙酮的反应时间依赖性 | 第40-41页 |
| ·对菌体还原的底物浓度依赖性 | 第41-42页 |
| ·菌体还原苯乙酮和3′-氯-苯乙酮的立体选择性 | 第42-44页 |
| ·表面活性剂对链霉菌还原苯乙酮和3′-氯-苯乙酮的影响 | 第44-45页 |
| ·有机助溶剂对链霉菌还原苯乙酮和3′氯-苯乙酮的影响 | 第45-46页 |
| ·辅助底物对链霉菌还原羰基化合物的影响 | 第46-47页 |
| ·氧化还原介体AQDS对链霉菌还原苯乙酮和3′氯-苯乙酮的影响 | 第47页 |
| ·培养基中添加苯乙酮进行菌的驯化 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 3 羰基还原基因工程菌的构建 | 第49-74页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料与仪器 | 第49-51页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·质粒 | 第49页 |
| ·培养基和培养条件 | 第49-50页 |
| ·酶与化学试剂 | 第50-51页 |
| ·主要实验仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-60页 |
| ·醇脱氢酶序列的选取 | 第51页 |
| ·醇脱氢酶活性预测 | 第51-52页 |
| ·放线菌Streptomyces avermitilis MA-4680总DNA的提取 | 第52-53页 |
| ·醇脱氢酶基因的PCR扩增 | 第53页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第53页 |
| ·质粒的提取 | 第53-54页 |
| ·DNA片段的切胶回收 | 第54-55页 |
| ·DNA片段的A处理 | 第55-56页 |
| ·DNA片段的精制 | 第56页 |
| ·限制性酶切反应 | 第56-57页 |
| ·线性DNA的连接 | 第57页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第57-58页 |
| ·重组菌株的培养和目的蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE) | 第58-59页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测(Western blotting) | 第59-60页 |
| ·蛋白浓度定量 | 第60页 |
| ·醇脱氢酶基因的无细胞体系表达 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-72页 |
| ·醇脱氢酶序列的选取 | 第60-62页 |
| ·醇脱氢酶活性预测 | 第62页 |
| ·醇脱氢酶基因的获得与扩增 | 第62-65页 |
| ·醇脱氢酶基因的亚克隆 | 第65-72页 |
| ·讨论 | 第72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录A 专有名词缩写 | 第79-80页 |
| 附录B 常用仪器一览表 | 第80-82页 |
| 附录C 常用试剂一览表 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
