| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 Abbreviation and acronyms | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 猪圆环病毒的概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 PCV-3分类与形态特征 | 第11页 |
| 1.1.2 PCV-3理化特性 | 第11-12页 |
| 1.2 PCV3引起的临床症状及病理变化 | 第12-13页 |
| 1.2.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征 | 第12页 |
| 1.2.2 猪皮炎肾病综合征 | 第12页 |
| 1.2.3 母猪繁殖障碍情况 | 第12页 |
| 1.2.4 增生性坏死性间质性肺炎 | 第12-13页 |
| 1.3 流行病学 | 第13页 |
| 1.3.1 感染部位 | 第13页 |
| 1.3.2 传播途径 | 第13页 |
| 1.3.3 易感动物 | 第13页 |
| 1.4 PCV3基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.5 主要结构蛋白及其功能 | 第14页 |
| 1.6 病毒的分离 | 第14页 |
| 1.7 PCV3的诊断技术 | 第14-16页 |
| 1.7.1 荧光定量PCR | 第15页 |
| 1.7.2 RT-LAMP技术 | 第15页 |
| 1.7.3 RT-PCR技术 | 第15页 |
| 1.7.4 ELISA技术 | 第15-16页 |
| 1.7.5 原位杂交技术(ISH) | 第16页 |
| 1.8 PCV3的防制措施 | 第16-17页 |
| 1.8.1 做好引种检疫工作 | 第16页 |
| 1.8.2 加强猪群的检疫 | 第16页 |
| 1.8.3 加强饲养管理 | 第16-17页 |
| 1.8.4 加快检测技术的研究 | 第17页 |
| 1.9 本课题研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 病料 | 第18页 |
| 2.2 抗体 | 第18页 |
| 2.3 菌株与载体 | 第18页 |
| 2.4 血清样品 | 第18页 |
| 2.5 主要试剂和试剂盒 | 第18页 |
| 2.6 主要溶液的配制 | 第18-20页 |
| 2.6.1 琼脂糖凝胶电泳用液 | 第18-19页 |
| 2.6.2 DH5α的制备及连接转化主要用液的制备 | 第19页 |
| 2.6.3 原核表达及SDS-PAGE电泳用液 | 第19-20页 |
| 2.6.4 Western-blotting用液 | 第20页 |
| 2.6.5 ELISA用液 | 第20页 |
| 2.7 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.8 PCV3-CAP基因序列分析 | 第21-25页 |
| 2.8.1 PCV3-Cap基因的扩增 | 第21-25页 |
| 2.9 PCV3-CAP蛋白间接ELISA方法的建立 | 第25-31页 |
| 2.9.1 PCV3-Cap540基因优势抗原表位区的扩增 | 第25页 |
| 2.9.2 重组表达质粒pET-32a(+)-Cap540的构建及鉴定 | 第25-27页 |
| 2.9.3 重组蛋白的原核表达及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.9.4 血清中PCV3IgG抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第28-31页 |
| 3 结果 | 第31-44页 |
| 3.1 PCV3-CAP基因序列分析 | 第31-34页 |
| 3.1.1 PCV3-Cap基因扩增结果 | 第31页 |
| 3.1.2 Cap基因序列测定及分析 | 第31页 |
| 3.1.3 PCV3-Cap基因序列同源性分析 | 第31-33页 |
| 3.1.4 进化树分析结果 | 第33-34页 |
| 3.2 重组表达质粒PET-32A(+)-CAP540的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.1 PCV3-Cap540基因的扩增及克隆 | 第34页 |
| 3.2.2 重组质粒pMD19-T-Cap540的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.3 pET-32a(+)-Cap540的构建 | 第35页 |
| 3.2.4 重组表达质粒pET-32a(+)-Cap540的双酶切鉴定 | 第35页 |
| 3.2.5 Cap540基因的测序鉴定 | 第35页 |
| 3.3 PET-32A(+)-CAP的原核表达及重组蛋白的鉴定 | 第35-38页 |
| 3.3.1 pET-32a(+)-Cap的原核表达 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组蛋白的可溶性检测 | 第36-37页 |
| 3.3.3 重组蛋白的纯化 | 第37页 |
| 3.3.4 纯化蛋白浓度的测定结果 | 第37页 |
| 3.3.5 Western-blotting鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 血清中PCV3IGG抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第38-43页 |
| 3.4.1 抗原、一抗最佳稀释浓度的确定 | 第38-39页 |
| 3.4.2 最佳包被条件的确定 | 第39页 |
| 3.4.3 最佳封闭液的确定 | 第39页 |
| 3.4.4 最佳封闭时间的确定 | 第39页 |
| 3.4.5 血清最佳反应时间的确定 | 第39-40页 |
| 3.4.6 酶标抗体最佳稀释浓度的确定 | 第40页 |
| 3.4.7 酶标抗体最佳作用时间的确定 | 第40页 |
| 3.4.8 底物最佳显色时间的确定 | 第40-41页 |
| 3.4.9 阴阳性临界值的确定 | 第41页 |
| 3.4.10 特异性试验 | 第41-42页 |
| 3.4.11 重复性试验 | 第42页 |
| 3.4.12 ROC曲线分析 | 第42-43页 |
| 3.5 河北地区圆环病毒 3 型抗体检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 PCV3的鉴定与CAP基因优势抗原表位区的克隆及原核表达 | 第44-45页 |
| 4.2 血清中PCV3IGG抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 附录 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 中文摘要 | 第53-54页 |
