| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第11-28页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-12页 |
| 1.2 沙门氏菌概述 | 第12-14页 |
| 1.2.1 沙门氏菌生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.2.2 沙门氏菌抗原构造与分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 沙门氏菌流行病学 | 第14页 |
| 1.2.4 沙门氏菌的致病性与主要致病血清型 | 第14页 |
| 1.3 沙门氏菌检测方法及研究进展 | 第14-18页 |
| 1.3.1 传统培养法 | 第14-16页 |
| 1.3.2 免疫学检测方法 | 第16页 |
| 1.3.3 分子生物学检测方法 | 第16-18页 |
| 1.3.4 其他检测方法 | 第18页 |
| 1.4 检测沙门氏菌常用的目的基因 | 第18-19页 |
| 1.4.1 16SrRNA基因 | 第18页 |
| 1.4.2 lygD基因 | 第18页 |
| 1.4.3 stn基因 | 第18页 |
| 1.4.4 inv组基因 | 第18-19页 |
| 1.5 环介导等温扩增技术及应用 | 第19-27页 |
| 1.5.1 LAMP技术简介 | 第19页 |
| 1.5.2 LAMP法的特点 | 第19-20页 |
| 1.5.3 LAMP引物设计与技术原理 | 第20-24页 |
| 1.5.4 LAMP操作步骤 | 第24-25页 |
| 1.5.5 LAMP产物的检测方法 | 第25-26页 |
| 1.5.6 LAMP技术在沙门氏菌检测中的应用 | 第26-27页 |
| 1.6 研究内容 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-30页 |
| 2.2.1 沙门氏菌的培养 | 第29页 |
| 2.2.2 沙门氏菌DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3 LAMP引物的设计筛选及操作程序 | 第30-32页 |
| 2.3.1 LAMP引物设计 | 第30页 |
| 2.3.2 引物的筛选 | 第30-32页 |
| 2.3.3 LAMP和PCR反应体系及操作程序 | 第32页 |
| 2.4 LAMP体系与反应条件优化 | 第32-34页 |
| 2.4.1 反应温度的优化 | 第33页 |
| 2.4.2 反应时间的优化 | 第33页 |
| 2.4.3 Mg2+浓度的选择 | 第33页 |
| 2.4.4 BST酶的优化 | 第33页 |
| 2.4.5 dNTPs浓度的优化 | 第33页 |
| 2.4.6 引物浓度比的优化及引物缺省情况比对 | 第33-34页 |
| 2.5 LAMP扩增产物的凝胶成像分析 | 第34页 |
| 2.6 LAMP产物可视化试验 | 第34-35页 |
| 2.6.1 浊度观察法 | 第34页 |
| 2.6.2 各显色指示剂添加量的优化 | 第34-35页 |
| 2.7 引物特异性试验 | 第35页 |
| 2.8 沙门氏菌的灵敏度检测 | 第35页 |
| 2.8.1 LAMP反应灵敏度 | 第35页 |
| 2.8.2 PCR反应灵敏度 | 第35页 |
| 2.9 沙门氏菌人工污染鸡蛋的检出限 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-51页 |
| 3.1 引物筛选的结果 | 第36-39页 |
| 3.1.1 引物PCR的检验结果 | 第36页 |
| 3.1.2 通用型LAMP试剂盒筛选引物 | 第36-38页 |
| 3.1.3 引物筛选结果的验证 | 第38-39页 |
| 3.2 反应条件及体系的优化 | 第39-45页 |
| 3.2.1 反应温度的优化 | 第39-40页 |
| 3.2.2 反应时间的优化 | 第40-41页 |
| 3.2.3 Mg~(2+)浓度的优化 | 第41-42页 |
| 3.2.4 BST酶添加量的优化 | 第42-43页 |
| 3.2.5 dNTPs浓度的优化 | 第43页 |
| 3.2.6 引物浓度比的优化 | 第43-44页 |
| 3.2.7 引物缺省试验 | 第44-45页 |
| 3.3 LAMP产物的可视化结果 | 第45-48页 |
| 3.3.1 浊度观察法可视化结果 | 第45-46页 |
| 3.3.2 添加显色剂可视化法结果 | 第46-48页 |
| 3.4 特异性试验结果 | 第48页 |
| 3.5 灵敏度检测结果 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 试验过程中问题的总结 | 第51-52页 |
| 4.1.1 体系各成分添加量的确定 | 第51页 |
| 4.1.2 引物缺省中的发卡扩增 | 第51页 |
| 4.1.3 显色指示剂的选择 | 第51-52页 |
| 4.1.4 实验操作经验总结 | 第52页 |
| 4.2 试验优缺点评价及防污染措施 | 第52-55页 |
| 4.2.1 试验优缺点评价 | 第52-53页 |
| 4.2.2 LAMP试验防污染的方法与展望 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 5.1 成功建立了环介导等温扩增技术检测沙门氏菌的方法 | 第55页 |
| 5.2 成功筛选出用于可视化结果鉴定的显色指示剂 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 详细摘要 | 第63-64页 |