| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略表 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 甾体化合物 | 第10-12页 |
| 1.1.1 甾体化合物的结构 | 第10页 |
| 1.1.2 甾体药物的功能与分类 | 第10-11页 |
| 1.1.3 甾体药物合成工艺的发展 | 第11-12页 |
| 1.2 微生物转化法生产甾体药物 | 第12-13页 |
| 1.2.1 雄烯二酮简介 | 第12页 |
| 1.2.2 微生物转化法生产雄烯二酮 | 第12-13页 |
| 1.3 3-甾酮-△1-脱氢酶(KsdD)的国内外研究进展 | 第13-17页 |
| 1.4 本课题的目的、意义和主要研究内容 | 第17-19页 |
| 1.4.1 本课题的目的和意义 | 第17页 |
| 1.4.2 本课题的主要研究内容 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要化学试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 主要储存液和缓冲液 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 重组大肠杆菌转化AD实验 | 第23页 |
| 2.2.2 分枝杆菌ksdD基因敲除菌株的构建 | 第23-30页 |
| 2.2.3 分枝杆菌ksdD基因置换菌株的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.4 分枝杆菌的植物甾醇转化实验 | 第33页 |
| 2.2.5 分枝杆菌KsdD酶转录水平的研究 | 第33-35页 |
| 2.3 分析方法 | 第35-37页 |
| 2.3.1 分枝杆菌转化PS产物的HPLC测定 | 第35页 |
| 2.3.2 重组大肠杆菌转化AD产物的TLC检测 | 第35-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-57页 |
| 3.1 氨基酸突变对KsdD酶活的影响 | 第37-53页 |
| 3.1.1 重组大肠杆菌中KsdD酶活的研究 | 第37-38页 |
| 3.1.2 分枝杆菌ksdD基因敲除菌株中KsdD酶活研究 | 第38-46页 |
| 3.1.3 分枝杆菌ksdD基因置换菌株中KsdD酶活研究 | 第46-53页 |
| 3.2 突变氨基酸影响KsdD酶活的作用机制分析 | 第53-55页 |
| 3.2.1 突变氨基酸在KsdD酶中的位点分析 | 第53-54页 |
| 3.2.2 突变氨基酸影响KsdD酶活的作用机制 | 第54-55页 |
| 3.3 分枝杆菌KsdD酶转录水平的分析 | 第55-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-68页 |
| 7 攻读学位期间论文发表情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
