| 摘要 | 第12-19页 |
| Abstract | 第19-27页 |
| 第一部分 体外Hca-F/P细胞与LEC共培养对VEGF-C/D—VEGFR-3/NRP-2及淋巴管相关分子表达的影响 | 第28-47页 |
| 前言 | 第28-29页 |
| 材料和方法 | 第29-34页 |
| 一、材料 | 第29-31页 |
| 1.1 肿瘤细胞系 | 第29-30页 |
| 1.2 主要试剂(见表1) | 第30页 |
| 1.3 主要仪器(见表2) | 第30-31页 |
| 二.方法 | 第31-34页 |
| 2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 2.2 实时定量PCR检测(real-time quantitativereverse transcription-polymerase chain-reaction，qRT-PCR) | 第31-32页 |
| 2.3 Western-Blot免疫印迹 | 第32页 |
| 2.4 酶联免疫吸附法（ELISA） | 第32-33页 |
| 2.5 淋巴管成形实验 | 第33页 |
| 2.6 细胞免疫荧光化学 | 第33页 |
| 2.7 统计学方法 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-38页 |
| 1. qRT-PCR、Western-Blot、细胞免疫荧光化学检测VEGF-C/D-VEGFR-3/NRP-2及淋巴管相关分子的表达 | 第34页 |
| 2.细胞免疫荧光化学检测 VEGF-C/D-VEGFR-3/NRP-2 及淋巴管相关分子在 LEC中的细胞定位 | 第34-38页 |
| 3.ELISA检测L-F共、L-P共共培养及LEC细胞上清中VEGF-C/D的表达 | 第38页 |
| 讨论 | 第38-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 第二部分 体外Hca-F/P细胞AnnexinA7沉默和过表达对共培养LEC中VEGF-C/D-VEGFR-3/NRP-2及淋巴管相关分子表达的影响 | 第47-66页 |
| 前言 | 第47-48页 |
| 材料和方法 | 第48-52页 |
| 1、材料 | 第48-49页 |
| 1.1 实验细胞 | 第48页 |
| 1.2 实验动物 | 第48页 |
| 1.3 主要实验试剂 (见表3) | 第48-49页 |
| 2.方法 | 第49-52页 |
| 2.1 细胞培养、转染和扩增 | 第49-50页 |
| 2.2 肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞共培养 | 第50页 |
| 2.3 实时定量 PCR 技术检测 (real-time quantitativereverse transcription-polymerase chain-reaction，q RT-PCR) | 第50页 |
| 2.4 Western- blot免疫印迹 | 第50-51页 |
| 2.5 酶联免疫吸附法（ELISA） | 第51页 |
| 2.6 淋巴管成形实验 | 第51页 |
| 2.7 细胞免疫荧光化学 | 第51页 |
| 2.8 统计学方法 | 第51-52页 |
| 结果 | 第52-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 结论 | 第60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 第三部分 Hca-F/P 细胞体内移植瘤淋巴结转移灶VEGF-C/D—VEGFR-3/NRP-2 及淋巴管相关分子的表达 | 第66-83页 |
| 前言 | 第66-67页 |
| 材料和方法 | 第67-70页 |
| 1.材料 | 第67-68页 |
| 1.1 肿瘤细胞 | 第67页 |
| 1.2 实验动物 | 第67页 |
| 1.3 实验试剂和主要仪器(见表6) | 第67-68页 |
| 2.方法 | 第68-70页 |
| 2.1 细胞复苏和培养同第一部分“材料与方法”2.1.1；2.1.2 | 第68页 |
| 2.2 建立高低不同淋巴道转移潜能F及P细胞肿瘤淋巴道转移动物模型 | 第68-69页 |
| 2.3 实时定量PCR检测 (real-time quantitativereverse transcription-polymerase chain-reaction，qRT-PCR) | 第69页 |
| 2.4 Western Blot-免疫印迹 | 第69页 |
| 2.5 HE染色 | 第69页 |
| 2.6 免疫组织化学 | 第69-70页 |
| 2.7 酶联免疫吸附法（ELISA） | 第70页 |
| 2.8. 统计学方法 | 第70页 |
| 结果 | 第70-77页 |
| 讨论 | 第77-80页 |
| 结论 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 第四部分 Hca-F/P细胞AnnexinA7调控对小鼠体内移植瘤淋巴结转移灶VEGF-C/D—VEGFR-3/NRP-2及淋巴管相关分子表达的影响 | 第83-105页 |
| 前言 | 第83-84页 |
| 材料和方法 | 第84-86页 |
| 1.材料 | 第84-85页 |
| 1.1 实验细胞 | 第84页 |
| 1.2 实验动物 | 第84页 |
| 1.3 实验试剂和主要仪器(见表7） | 第84-85页 |
| 2.方法 | 第85-86页 |
| 2.1 F_(A7下调)、P_(A7上调)、F_(SH无关序列)、P_(NC空载体)细胞在第二部分体外实验已成功构建并冻存，其复苏和培养同“第一部分材料与方法2.1.1；2.1.2”。 | 第85页 |
| 2.2 建立慢病毒稳定转染的F_(A7下调)、P_(A7上调)、F_(SH无关序列)、P_(NC空载体)细胞肿瘤淋巴道转移动物模型 | 第85页 |
| 2.3 实时定量PCR检测 (real-time quantitativereverse transcription-polymerase chain-reaction，qRT-PCR) | 第85页 |
| 2.4 Western Bolt-免疫印迹 | 第85页 |
| 2.5 HE染色 | 第85-86页 |
| 2.6免疫组织化学 | 第86页 |
| 2.7 酶联免疫吸附法（ELISA） | 第86页 |
| 2.8 小动物活体成像系统 | 第86页 |
| 2.9. 统计学方法 | 第86页 |
| 结果 | 第86-94页 |
| 讨论 | 第94-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 综述 | 第105-129页 |
| 参考文献 | 第119-129页 |
| 附录 | 第129-130页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
