| 摘要 | 第7-12页 |
| Abstract | 第12-17页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 材料和方法 | 第22-58页 |
| 1.细胞培养 | 第22-25页 |
| 2.肿瘤标本获取及处理 | 第25-26页 |
| 3.质粒瞬时转染 | 第26-27页 |
| 4.siRNA瞬时干扰 | 第27页 |
| 5.siRNA瞬时干扰 | 第27-28页 |
| 6.microRNA抑制性瞬时干扰 | 第28-29页 |
| 7.总RNA提取和反转录 | 第29-31页 |
| 8.实时荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 9.载体构建 | 第32-37页 |
| 10.构建稳定转染细胞株 | 第37页 |
| 11.蛋白免疫印迹法 | 第37-43页 |
| 12.免疫荧光 | 第43-45页 |
| 13.苏木素-伊红染色法(HE染色) | 第45-46页 |
| 14.CCK8细胞增殖检测 | 第46页 |
| 15.动物实验 | 第46-49页 |
| 16.原代细胞分离及培养 | 第49-50页 |
| 17.细胞乳酸含量测定 | 第50-51页 |
| 18.细胞葡萄糖摄取量测定 | 第51-52页 |
| 19.细胞ATP生成量测定 | 第52-53页 |
| 20.细胞PDH活性测定 | 第53-54页 |
| 21.活细胞分选实验 | 第54页 |
| 22.细胞微球体形成实验 | 第54-55页 |
| 23.BrdU染色实验 | 第55-56页 |
| 24.细胞周期检测实验 | 第56页 |
| 25.荧光素酶报告基因检测实验 | 第56-57页 |
| 26.生物信息分析及统计学分析 | 第57-58页 |
| 结果 | 第58-79页 |
| 1.PDK1对乳腺癌细胞的干性维持起重要作用 | 第58-62页 |
| 2.低氧条件下PDK1基因激活糖酵解增强肿瘤干细胞特性 | 第62-65页 |
| 3.低氧条件下H19促进糖酵解和乳腺癌肿瘤干细胞特性 | 第65-68页 |
| 4.沉默PDK1抑制H19介导的糖酵解过程和肿瘤干细胞特性 | 第68-72页 |
| 5.H19通过调节HIF-1α促进PDK1基因的表达 | 第72-75页 |
| 6.阿司匹林通过降低H19和PDK1的表达抑制糖酵解水平和肿瘤干细胞特性 | 第75-79页 |
| 讨论 | 第79-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 综述 | 第90-122页 |
| 参考文献 | 第105-122页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
