| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 植物的开花 | 第12-18页 |
| 1.1.1 光周期途径 | 第13-14页 |
| 1.1.2 自主开花途径 | 第14-15页 |
| 1.1.3 赤霉素(GA)途径 | 第15页 |
| 1.1.4 环境温度途径 | 第15-16页 |
| 1.1.5 年龄途径 | 第16-17页 |
| 1.1.6 春化途径 | 第17-18页 |
| 1.2 VRN1与温带禾本科植物开花时间调控的关系 | 第18-24页 |
| 1.2.1 VRN1的克隆 | 第18-19页 |
| 1.2.2 VRN1的表达受春化诱导 | 第19页 |
| 1.2.3 VRN1的表达受表观遗传学的调控 | 第19-20页 |
| 1.2.4 VRN1突变体表现晚花或者永不开花 | 第20-21页 |
| 1.2.5 VRN1,FT,VRN2的上下游关系 | 第21-24页 |
| 1.3 温带禾本科植物的模式材料——二穗短柄草(Brachypodium distachyon) | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料和种植 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.2 热激法转化大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR菌落筛选 | 第29页 |
| 2.2.4 小量碱法提取质粒 | 第29-31页 |
| 2.2.5 小量试剂盒提取质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.6 农杆菌EHA105感受态的制备 | 第32页 |
| 2.2.7 冻融法转化农杆菌 | 第32页 |
| 2.2.8 Trizol法提取RNA | 第32-33页 |
| 2.2.9 反转录合成cDNA | 第33页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 2.3 载体构建 | 第34-37页 |
| 2.3.1 PCR扩增目的片段 | 第34-35页 |
| 2.3.2 TA克隆 | 第35页 |
| 2.3.3 连接反应 | 第35-36页 |
| 2.3.4 胶回收 | 第36页 |
| 2.3.5 表达载体构建 | 第36-37页 |
| 2.4 二穗短柄草的遗传转化 | 第37-42页 |
| 2.4.1 诱导愈伤组织 | 第37-38页 |
| 2.4.2 二穗短柄草的侵染 | 第38-39页 |
| 2.4.3 二穗短柄草的共培养 | 第39页 |
| 2.4.4 二穗短柄草的筛选 | 第39-40页 |
| 2.4.5 转基因植株分化再生 | 第40-42页 |
| 2.4.6 转基因苗的鉴定 | 第42页 |
| 2.5 转基因材料分析 | 第42-43页 |
| 2.5.1 CTAB法提取基因组 | 第42页 |
| 2.5.2 PCR鉴定转基因植株 | 第42-43页 |
| 2.5.3 GUS组织化学染色鉴定转基因植株 | 第43页 |
| 2.6 二穗短柄草取材 | 第43-45页 |
| 2.6.1 转基因植株鉴定取材 | 第43-44页 |
| 2.6.2 春化相关基因表达量检测取材 | 第44页 |
| 2.6.3 雌激素诱导实验 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-56页 |
| 3.1 二穗短柄草VRN1的功能分析 | 第45-52页 |
| 3.1.1 BdVRN1过表达及RNAi载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.1.2 长日照条件下过表达BdVRN1 | 第46-47页 |
| 3.1.3 短日照条件下过表达BdVRN1 | 第47-48页 |
| 3.1.4 长日照条件下BdVRNl RNAi表型 | 第48-49页 |
| 3.1.5 BdVRN1过表达转基因植株分析 | 第49-51页 |
| 3.1.6 BdVRN1 RNAi转基因植株分析 | 第51-52页 |
| 3.1.7 BdVRN1过表达植株花器官解剖分析 | 第52页 |
| 3.2 BdVRN1下游直接靶基因的鉴定 | 第52-56页 |
| 3.2.1 小标签载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.2.2 小标签载体功能验证 | 第54-55页 |
| 3.2.3 雌激素诱导小标签融合蛋白表达 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
