| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩略词汇表 | 第12-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-28页 |
| 1.1 红细胞 | 第14-18页 |
| 1.1.1 红细胞概况 | 第14页 |
| 1.1.2 红细胞膜结构与功能血浆 | 第14-16页 |
| 1.1.3 红细胞衰老与凋亡 | 第16-18页 |
| 1.2 红系发育 | 第18-21页 |
| 1.2.1 造血系统 | 第18-19页 |
| 1.2.2 红细胞发育 | 第19-21页 |
| 1.3 红系发育异常相关疾病 | 第21-23页 |
| 1.3.1 骨髓增生异常综合征(MDS) | 第21-22页 |
| 1.3.2 急性髓系白血病(AML) | 第22-23页 |
| 1.4 STAG2基因 | 第23-26页 |
| 1.4.1 SCC3同源家族 | 第23-24页 |
| 1.4.2 黏着素复合物 | 第24-25页 |
| 1.4.3 STAG2基因突变与MDS和AML | 第25-26页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第26-28页 |
| 第2章 SCC3同源家族的生物信息学分析 | 第28-35页 |
| 2.1 生物信息学分析方法与蛋白序列来源 | 第28-29页 |
| 2.1.1 生物信息学数据库及分析方法 | 第28页 |
| 2.1.2 蛋白序列来源 | 第28-29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.2.1 构建SCC3同源物的系统发育进化树 | 第29-30页 |
| 2.2.2 STAG1、STAG2与STAG3基因及蛋白信息 | 第30-33页 |
| 2.2.3 STAG1、STAG2和STAG3蛋白理化性质的分析 | 第33页 |
| 2.2.4 STAG1、STAG2和STAG3在有关细胞中的表达 | 第33-34页 |
| 2.3 结果讨论 | 第34-35页 |
| 第3章 STAG2敲低对K562和HEL细胞株向红系分化的影响 | 第35-66页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第35-39页 |
| 3.1.1 主要材料与试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.3 细胞株 | 第37页 |
| 3.1.4 常用试剂配置 | 第37-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-52页 |
| 3.2.1 STAG2敲低表达型载体的构建 | 第39-44页 |
| 3.2.1.1 STAG2基因的2条siRNA序列 | 第39-40页 |
| 3.2.1.2 设计shRNA的寡核苷酸链序列 | 第40-41页 |
| 3.2.1.3 shRNA在PH1质粒上的插入位点 | 第41页 |
| 3.2.1.4 pRRL载体信息 | 第41页 |
| 3.2.1.5 得到含有PH1启动子H1的shRNA序列 | 第41-43页 |
| 3.2.1.6 得到含有H1启动子的pRRL-shRNA | 第43-44页 |
| 3.2.2 慢病毒的包装 | 第44-46页 |
| 3.2.2.1 复苏293T细胞 | 第44页 |
| 3.2.2.2 传代293T细胞 | 第44-45页 |
| 3.2.2.3 转染293T细胞 | 第45页 |
| 3.2.2.4 慢病毒的浓缩 | 第45-46页 |
| 3.2.2.5 慢病毒滴度的检测 | 第46页 |
| 3.2.3 慢病毒感染K562和HEL细胞 | 第46-47页 |
| 3.2.3.1 K562和HEL细胞的复苏 | 第46-47页 |
| 3.2.3.2 K562和HEL细胞的传代 | 第47页 |
| 3.2.3.3 K562和HEL细胞的转染 | 第47页 |
| 3.2.4 检测STAG2在K562和HEL细胞中的mRNA表达水平 | 第47-50页 |
| 3.2.4.1 qRT-PCR引物信息 | 第47-48页 |
| 3.2.4.2 RNA的提取 | 第48-49页 |
| 3.2.4.3 RNA反转录为cDNA | 第49页 |
| 3.2.4.4 qRT-PCR | 第49-50页 |
| 3.2.5 Hemin诱导K562和HEL细胞向红系分化 | 第50页 |
| 3.2.6 细胞增殖的检测 | 第50页 |
| 3.2.7 K562和HEL细胞向红系分化的检测 | 第50-51页 |
| 3.2.8 细胞凋亡的检测 | 第51页 |
| 3.2.9 细胞周期的检测 | 第51-52页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-65页 |
| 3.3.1 完成pRRL-shRNA载体的构建 | 第52-55页 |
| 3.3.2 获得STAG2稳定敲低的K562和HEL细胞株 | 第55-57页 |
| 3.3.3 STAG2敲低对K562和HEL细胞株相关红系分化的影响 | 第57-65页 |
| 3.3.3.1 敲低STAG2抑制K562和HEL细胞增殖 | 第57-58页 |
| 3.3.3.2 敲低STAG2延迟K562和HEL细胞向红系分化 | 第58-61页 |
| 3.3.3.3 敲低STAG2促进K562和HEL细胞凋亡 | 第61-64页 |
| 3.3.3.4 敲低STAG2对K562和HEL细胞周期无显著性影响 | 第64-65页 |
| 3.4 结果讨论 | 第65-66页 |
| 第4章 STAG2敲低对CD34~+细胞向红系发育的影响 | 第66-83页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第66-68页 |
| 4.1.1 主要材料与试剂 | 第66-67页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第67页 |
| 4.1.3 脐带血来源 | 第67页 |
| 4.1.4 主要溶液的配制 | 第67页 |
| 4.1.5 细胞培养基的配制 | 第67-68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-72页 |
| 4.2.1 CD34~+细胞的分离 | 第68-69页 |
| 4.2.2 CD34~+细胞的体外培养 | 第69-70页 |
| 4.2.3 红系祖细胞分化的检测 | 第70页 |
| 4.2.4 红系终末分化的检测 | 第70-71页 |
| 4.2.5 细胞脱核的检测 | 第71页 |
| 4.2.6 MGG染色 | 第71页 |
| 4.2.7 统计学分析 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与分析 | 第72-82页 |
| 4.3.1 敲低STAG2延迟红系祖细胞的分化 | 第72-73页 |
| 4.3.2 敲低STAG2对红系终末分化的影响 | 第73-78页 |
| 4.3.3 敲低STAG2抑制细胞的脱核 | 第78-79页 |
| 4.3.4 红细胞形态学的变化 | 第79-82页 |
| 4.4 结果讨论 | 第82-83页 |
| 第5章 全文讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
