| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 英文缩略语 | 第12-15页 |
| 第一部分 血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移及NF-κB通路促进血管紧张素Ⅱ诱导BAG3的表达及其作用机制 | 第15-52页 |
| 1 前言 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 主要实验药品及试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 细胞培养与分组 | 第22-23页 |
| 2.2.2 AngⅡ的配制 | 第23页 |
| 2.2.3 BAG3-shRNA设计合成与转染 | 第23页 |
| 2.2.4 细胞计数法评估AngⅡ对血管平滑肌细胞增殖的影响 | 第23-24页 |
| 2.2.5 MTS评估AngⅡ对血管平滑肌细胞增殖能力影响 | 第24页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测AngⅡ对VSMCs细胞周期分布变化的影响 | 第24-25页 |
| 2.2.7 细胞形态学观察 | 第25页 |
| 2.2.8 细胞培养及药物作用 | 第25-26页 |
| 2.2.9 RT-PCR检测AngⅡ对VSMCs增殖相关标志因子的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.10 WesternBlot法检测AngⅡ对VSMCs增殖相关标志因子的影响 | 第27-30页 |
| 2.2.11 BAG3质粒的扩增、抽提及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.12 Transwell实验检测VSMCs迁移 | 第31-32页 |
| 2.2.13 伤口愈合实验 | 第32页 |
| 2.2.14 统计学处理 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-48页 |
| 3.1 AngⅡ诱导VSMCs增殖呈量-效及时-效关系 | 第33-34页 |
| 3.2 AngⅡ对VSMCs细胞周期的影响 | 第34-35页 |
| 3.3 AngⅡ对VSMCs迁移的影响 | 第35-36页 |
| 3.4 AngⅡ对VSMCs分化标志性基因SM22α和增殖标志基因PCNA表达的影响 | 第36-39页 |
| 3.5 AngⅡ通过上调BAG3表达促进VSMCs增殖和迁移 | 第39-45页 |
| 3.6 AngⅡ激活VMSCs中NF-κBp65信号通路 | 第45-46页 |
| 3.7 抑制NF-κBp65信号通路的活性可以下调AngⅡ诱导的VSMCs中BAG3的表达 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 第二部分 大鼠重组Klotho蛋白抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠平滑肌细胞增殖、迁移及其对NF-κBp65/BAG3信号通路的作用及机制 | 第52-81页 |
| 1 前言 | 第52-54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第54-59页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第54页 |
| 2.1.2 主要药品和试剂 | 第54-55页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第55-56页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第56-59页 |
| 2.2 实验方法 | 第59-67页 |
| 2.2.1 细胞培养与分组 | 第59-60页 |
| 2.2.2 AngⅡ的配制 | 第60页 |
| 2.2.3 大鼠重组Klotho蛋白的配制 | 第60页 |
| 2.2.4 实验分组 | 第60-61页 |
| 2.2.5 细胞计数法检测Klotho对AngⅡ对培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 | 第61页 |
| 2.2.6 MTS评估AngⅡ对血管平滑肌细胞增殖影响 | 第61页 |
| 2.2.7 流式细胞术检测Kloth对AngⅡ诱导VSMCs细胞周期分布变化的影响 | 第61-62页 |
| 2.2.8 细胞形态学观察 | 第62页 |
| 2.2.9 WesternBlot法检测AngⅡ对VSMCs增殖相关标志因子的影响 | 第62-64页 |
| 2.2.10 鬼笔环肽染色检测VSMCs肌丝结构,骨架变化 | 第64-65页 |
| 2.2.11 Transwell实验检测VSMCs迁移 | 第65-66页 |
| 2.2.12 伤口愈合实验 | 第66页 |
| 2.2.13 统计学处理 | 第66-67页 |
| 3 实验结果 | 第67-77页 |
| 3.1 Klotho蛋白对AngⅡ诱导VSMCs细胞MTS代谢率的影响 | 第67页 |
| 3.2 Klotho蛋白对AngⅡ诱导VSMCs计数的影响 | 第67-68页 |
| 3.3 Klotho对AngⅡ诱导VSMCs细胞周期的影响 | 第68-69页 |
| 3.4 Klotho对AngⅡ诱导的VSMCs周期调控蛋白表达的影响 | 第69-70页 |
| 3.5 Klotho抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移能力 | 第70-71页 |
| 3.6 Klotho降低AngⅡ诱导的VSMCs内迁移相关蛋白的表达 | 第71-72页 |
| 3.7 Klotho抑制AngⅡ诱导的VSMCs的形态、面积变化及肌丝、骨架重排 | 第72-73页 |
| 3.8 Klotho对AngⅡ诱导VSMCs分化标志性基因SM22α和增殖标志基因PCNA表达的影响 | 第73-74页 |
| 3.9 Klotho通过调节NF-κBp65/BAG3信号通路抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖、转移 | 第74-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| 5 结论 | 第80-81页 |
| 全文结论 | 第81-82页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 综述 | 第92-115页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 个人简历 | 第118页 |
