| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 引言 | 第9-15页 |
| 1 酵母双杂交系统简介 | 第9-14页 |
| 1.1 酵母双杂交系统的原理 | 第9-11页 |
| 1.2 酵母双杂交系统的结构组成 | 第11页 |
| 1.3 酵母双杂交技术的优缺点 | 第11-13页 |
| 1.4 酵母双杂交技术的应用 | 第13页 |
| 1.5 酵母双杂交技术的发展 | 第13-14页 |
| 技术路线图 | 第14-15页 |
| 第一章 实验材料与实验方法 | 第15-32页 |
| 1 实验材料 | 第15-19页 |
| 1.1 所用质粒、菌株的特性与来源 | 第15页 |
| 1.2 成人脑预制文库 | 第15-16页 |
| 1.3 各种试剂及试剂盒 | 第16-17页 |
| 1.4 实验仪器 | 第17页 |
| 1.5 其它试剂 | 第17页 |
| 1.6 所需溶液及配制 | 第17-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-32页 |
| 2.1 人Dnd1酵母双杂交诱饵穿梭质粒的构建及鉴定 | 第19-25页 |
| 2.2 人诱饵穿梭质粒pDBLeu-Dnd1的自身激活及毒性检测 | 第25-27页 |
| 2.3 DND1相互作用蛋白的cDNA文库筛选 | 第27-29页 |
| 2.4 阳性酵母菌落的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5 回转验证 | 第30-31页 |
| 2.6 阳性克隆文库质粒测序分析 | 第31-32页 |
| 第二章 结果与分析 | 第32-41页 |
| 1 人Dnd1酵母双杂交诱饵穿梭质粒的构建及鉴定 | 第32-35页 |
| 1.1 Dnd1基因的获得PCR扩增人Dnd1目的片段 | 第32页 |
| 1.2 重组诱饵穿梭质粒pDBLeu-Dnd1的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 1.3 重组诱饵穿梭质粒pDBLeu-Dnd1的测序鉴定 | 第33-35页 |
| 2 诱饵穿梭质粒pDBLeu-Dnd1的自身激活及毒性检测 | 第35-37页 |
| 2.1 诱饵穿梭质粒pDBLeu-Dnd1的自身激活检测 | 第35-37页 |
| 2.2 诱饵穿梭质粒pDBLeu-Dnd1的毒性检测 | 第37页 |
| 3 文库的筛选 | 第37-38页 |
| 3.1 酵母菌阳性克隆的三轮筛选 | 第37-38页 |
| 4 阳性酵母菌落的鉴定 | 第38-41页 |
| 4.1 阳性菌落送测序的标准 | 第38-39页 |
| 4.2 酵母质粒提取与鉴定 | 第39页 |
| 4.3 测序结果分析 | 第39页 |
| 4.4 阳性克隆文库质粒的回转验证 | 第39页 |
| 4.5 阳性克隆猎物质粒测序与分析 | 第39-40页 |
| 4.6 阳性克隆文库质粒序列编码蛋白质的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 第三章 讨论 | 第41-45页 |
| 第四章 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-55页 |
| 综述 | 第55-64页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 攻读硕士学位期间的主要成果 | 第64-65页 |
| 英文缩略词表 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
