| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 沙冬青概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 沙冬青的种类及分布 | 第12页 |
| 1.1.2 沙冬青的非生物胁迫研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2 植物脱水素蛋白概述 | 第13-18页 |
| 1.2.1 脱水素蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 脱水素蛋白的分布 | 第15页 |
| 1.2.3 脱水素蛋白的功能与调控机制 | 第15-18页 |
| 1.2.4 植物脱水素蛋白的研究进展 | 第18页 |
| 1.3 植物受非生物胁迫的方式 | 第18-20页 |
| 1.3.1 低温胁迫 | 第19页 |
| 1.3.2 干旱与盐胁迫 | 第19页 |
| 1.3.3 外源激素胁迫 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的内容和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 新疆沙冬青脱水素基因的克隆与序列分析 | 第21-35页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验仪器及药品 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 新疆沙冬青叶片总RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 cDNA第一链合成 | 第22页 |
| 2.2.3 内参检测 | 第22-23页 |
| 2.2.4 基因同源区扩增 | 第23页 |
| 2.2.5 同源区克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.6 5 ’RACE扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.7 3 ’RACE扩增 | 第26页 |
| 2.2.8 全长序列拼接 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-33页 |
| 2.3.1 RNA检测结果 | 第27页 |
| 2.3.2 Actin内参基因检测结果 | 第27页 |
| 2.3.3 同源区克隆与测序结果 | 第27-28页 |
| 2.3.4 5 ’RACE扩增与检测结果 | 第28-30页 |
| 2.3.5 3 ’RACE扩增与检测结果 | 第30-32页 |
| 2.3.6 全长序列拼接结果 | 第32页 |
| 2.3.7 序列分析与比对 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 新疆沙冬青脱水素基因启动子克隆与序列分析 | 第35-44页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第35页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 3.1.2 实验仪器及药品 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 新疆沙冬青叶片DNA提取 | 第35-36页 |
| 3.2.2 限制性内切酶酶切 | 第36页 |
| 3.2.3 酶切产物纯化 | 第36页 |
| 3.2.4 酶切产物添加接头 | 第36-37页 |
| 3.2.5 染色体步移第一轮PCR筛选 | 第37页 |
| 3.2.6 染色体步移第二轮PCR筛选 | 第37-38页 |
| 3.2.7 PCR扩增产物电泳检测 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 DNA检测结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 限制性内切酶酶切结果 | 第40页 |
| 3.3.3 染色体步移第二轮PCR结果 | 第40页 |
| 3.3.4 TA克隆菌落PCR结果 | 第40-41页 |
| 3.3.5 TA克隆测序结果 | 第41页 |
| 3.3.6 AnDHN基因启动子序列 | 第41页 |
| 3.3.7 启动子调控元件分析结果 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 不同胁迫处理下新疆沙冬青脱水素基因的表达分析 | 第44-53页 |
| 4.1 材料和方法 | 第44页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 4.1.2 处理方法 | 第44页 |
| 4.1.3 实验仪器及药品 | 第44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 新疆沙冬青叶片总RNA提取 | 第44页 |
| 4.2.2 cDNA第一链合成 | 第44-45页 |
| 4.2.3 内参检测 | 第45页 |
| 4.2.4 基因特异引物检测 | 第45页 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-51页 |
| 4.3.1 总RNA电泳结果 | 第46页 |
| 4.3.2 内参基因及基因特异引物检测结果 | 第46-47页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR结果 | 第47-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 新疆沙冬青脱水素基因表达载体的构建和原核表达 | 第53-61页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第53-54页 |
| 5.1.1 菌株与载体 | 第53页 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 | 第53-54页 |
| 5.2 试验方法 | 第54-56页 |
| 5.2.1 重组质粒构建 | 第54-55页 |
| 5.2.2 蛋白表达及纯化 | 第55-56页 |
| 5.2.3 原核表达 | 第56页 |
| 5.3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 5.3.1 AnDHN编码区克隆 | 第56-57页 |
| 5.3.2 菌落PCR鉴定阳性单克隆 | 第57页 |
| 5.3.3 菌落PCR鉴定结果 | 第57-58页 |
| 5.3.4 诱导表达蛋白电泳结果 | 第58页 |
| 5.3.5 超声破碎电泳结果 | 第58页 |
| 5.3.6 蛋白纯化结果 | 第58-59页 |
| 5.3.7 蛋白定量结果 | 第59页 |
| 5.3.8 涂板观察非生物胁迫下大肠杆菌的生长趋势 | 第59-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 结论 | 第61-62页 |
| 6.1 AnDHN基因的克隆与分析 | 第61页 |
| 6.2 AnDHN基因启动子的克隆与分析 | 第61页 |
| 6.3 不同胁迫处理下AnDHN基因的表达分析 | 第61页 |
| 6.4 AnDHN基因表达载体的构建和原核表达分析 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第70-71页 |
