| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| 1.1 葡萄球菌及食物中毒 | 第9-11页 |
| 1.1.1 葡萄球菌简介 | 第9页 |
| 1.1.2 葡萄球菌分类 | 第9-10页 |
| 1.1.3 葡萄球菌的生物学特性 | 第10页 |
| 1.1.4 葡萄球菌与食物中毒 | 第10-11页 |
| 1.2 葡萄球菌肠毒素 | 第11-20页 |
| 1.2.1 葡萄球菌肠毒素简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 葡萄球菌肠毒素分型及新型肠毒素seg、selu 基因的特点 | 第12-15页 |
| 1.2.3 葡萄球菌肠毒素蛋白分子结构 | 第15-16页 |
| 1.2.4 肠毒素的生物活性 | 第16-18页 |
| 1.2.5 肠毒素与酶的关系 | 第18页 |
| 1.2.6 肠毒素的致病性 | 第18-20页 |
| 1.3 葡萄球菌肠毒素生物活性检测技术 | 第20-24页 |
| 1.3.1 超抗原性测定 | 第20页 |
| 1.3.2 抗肿瘤活性检测 | 第20-21页 |
| 1.3.3 细胞凋亡检测 | 第21-24页 |
| 1.4 课题研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 葡萄球菌肠毒素seg、selu 基因的克隆及分析 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 葡萄球菌DNA 提取试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 质粒提取所用试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第27页 |
| 2.1.6 琼脂糖凝胶的配制 | 第27页 |
| 2.1.7 培养基 | 第27页 |
| 2.1.8 主要器材 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 肠毒素SEG、SEU 表达引物的设计 | 第28页 |
| 2.2.2 葡萄球菌DNA 的制备 | 第28页 |
| 2.2.3 seg、selu 基因PCR 扩增的反应体系及反应程序 | 第28-29页 |
| 2.2.4 目的基因的回收 | 第29页 |
| 2.2.5 目的基因与T 载体的连接 | 第29页 |
| 2.2.6 感受态细胞E. coli DH5α的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第30页 |
| 2.2.8 T-seg、T-selu 重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.9 seg、selu 的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-36页 |
| 2.3.1 SEG、SEU 信号肽分析 | 第31-32页 |
| 2.3.2 葡萄球菌肠毒素基因seg、selu 的PCR 扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.3 T-seg、T-selu 重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| 2.3.4 T-seg、T-selu 测序鉴定 | 第33页 |
| 2.3.5 seg、selu 的生物信息学分析 | 第33-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 葡萄球菌肠毒素SEG、SEU 的原核表达与纯化 | 第38-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 载体与菌株 | 第38-39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 诱导表达试剂 | 第39页 |
| 3.1.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）所用试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.5 蛋白纯化试剂 | 第40页 |
| 3.1.6 Western-Blot 所用溶液 | 第40-41页 |
| 3.1.7 Prescission protease（PPE）切割所用试剂 | 第41页 |
| 3.1.8 主要器材 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 质粒的制备 | 第41页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR 扩增 | 第41页 |
| 3.2.3 原核重组表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.4 重组质粒鉴定 | 第42页 |
| 3.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.2.6 重组蛋白的亲和层析纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第44-45页 |
| 3.2.8 重组蛋白的Western-Blot 鉴定 | 第45页 |
| 3.2.9 SEG、SEU 单体蛋白的制备 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.3.1 重组质粒鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第47-48页 |
| 3.3.3 重组蛋白的特异性鉴定 | 第48页 |
| 3.3.4 SEG、SEU 单体蛋白的制备 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 3.4.1 成功构建seg、selu 的融合表达载体 | 第50页 |
| 3.4.2 重组蛋白的诱导表达、纯化及其稳定性 | 第50-51页 |
| 3.4.3 关于SEG、SEU 单体蛋白的制备 | 第51-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 葡萄球菌肠毒素SEG、SEU 的结构与功能分析 | 第53-67页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 单体蛋白及实验动物 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 生物活性检测所用溶液 | 第53-54页 |
| 4.1.4 主要器材 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 SEG、SEU 的生物活性检测 | 第54-55页 |
| 4.2.2 肠毒素SEG、SEU 的结构分析 | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-63页 |
| 4.3.1 肠毒素促脾细胞增殖作用 | 第56-57页 |
| 4.3.2 肠毒素诱导脾细胞凋亡作用 | 第57页 |
| 4.3.3 肠毒素致小鼠体内氧化酶活变化作用 | 第57-58页 |
| 4.3.4 SEG、SEU 的二级结构预测 | 第58-59页 |
| 4.3.5 肠毒素蛋白SEG、SEU 的CD 测定 | 第59-60页 |
| 4.3.6 SEG、SEU 蛋白的2D 结构分析 | 第60-61页 |
| 4.3.7 SEU 三维空间结构的同源建模 | 第61页 |
| 4.3.8 SEU 功能活性的结构基础分析 | 第61-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-66页 |
| 4.4.1 肠毒素的超抗原性 | 第63-64页 |
| 4.4.2 肠毒素的细胞毒性 | 第64页 |
| 4.4.3 肠毒素SEG、SEU 的结构分析 | 第64-65页 |
| 4.4.4 关于SEU 功能活性的分子基础 | 第65-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 第五章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第75-76页 |
| 附录一：主要化学试剂 | 第76-78页 |
| 附录二：主要器材 | 第78-79页 |
| 附录三：缩略词 | 第79-80页 |
| 附录四：seg 的GenBank 序列 | 第80-82页 |
| 附录五：selu 的GenBank 序列 | 第82-84页 |
| 附录六：seg、selu 原核表达载体构建示意图 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
