| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第17-29页 |
| 1.1 p21的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.1.1 国内外p21的研究基本概况 | 第17页 |
| 1.1.2 p21的结构与功能 | 第17-20页 |
| 1.1.2.1 P21是细胞周期的一个负调控因子 | 第18页 |
| 1.1.2.2 p21调节基因的转录 | 第18-19页 |
| 1.1.2.3 p21是细胞凋亡的调节子 | 第19-20页 |
| 1.1.2.4 p21与DNA修复 | 第20页 |
| 1.2 p21的转录调节与癌症 | 第20-22页 |
| 1.2.1 CDKN1A基因转录激活的致癌 | 第20-21页 |
| 1.2.2 CDKN1A转录的p53非依赖调节 | 第21-22页 |
| 1.3 衰老与癌症 | 第22-27页 |
| 1.3.1 衰老的九大特征 | 第23-26页 |
| 1.3.2 衰老与癌症的辩证关系 | 第26-27页 |
| 1.4 WS综合症-研究衰老过程的理想模型 | 第27-28页 |
| 1.4.1 人类WS概述 | 第27页 |
| 1.4.2 小鼠衰老模型(WS)的构建 | 第27-28页 |
| 1.5 本研究的主要内容及意义 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料 | 第29-40页 |
| 2.1 MEF细胞与小鼠 | 第29页 |
| 2.2 实验主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.3 实验试剂 | 第30-32页 |
| 2.4 试剂配制 | 第32-40页 |
| 第三章 实验方法 | 第40-62页 |
| 3.1 小鼠MEF细胞的制作 | 第40-41页 |
| 3.2 细胞培养 | 第41-43页 |
| 3.2.1 细胞的复苏 | 第41-42页 |
| 3.2.2 细胞传代 | 第42页 |
| 3.2.3 细胞冻存 | 第42-43页 |
| 3.3 细胞收集 | 第43-44页 |
| 3.4 免疫荧光检测DNA损伤情况 | 第44-46页 |
| 3.4.1 免疫荧光检测DNA损伤的基本原理 | 第44页 |
| 3.4.2 免疫荧光检测DNA损伤的一般步骤 | 第44-46页 |
| 3.5 冰冻切片组织衰老相关β-半乳糖苷酶检测(Senescence-associatedbeta-galactosidase,SA—βgal) | 第46页 |
| 3.6 Western Blot蛋白免疫印迹 | 第46-51页 |
| 3.6.1 总蛋白提取 | 第46-47页 |
| 3.6.2 蛋白定量 | 第47-48页 |
| 3.6.3 SDS-PAGE电泳体系配制 | 第48页 |
| 3.6.4 SDS-PAGE电泳 | 第48-49页 |
| 3.6.5 Western Blot——转膜 | 第49-50页 |
| 3.6.6 封闭 | 第50页 |
| 3.6.7 一抗孵育 | 第50页 |
| 3.6.8 二抗孵育 | 第50页 |
| 3.6.9 显影 | 第50-51页 |
| 3.6.10 抗体的剥离 | 第51页 |
| 3.7 实时荧光PCR | 第51-56页 |
| 3.7.1 总RNA的提取 | 第51-53页 |
| 3.7.2 RNA反转录成单链DNA(cDNA) | 第53-54页 |
| 3.7.3 RT-PCR(实时定量荧光PCR) | 第54-55页 |
| 3.7.3.1 引物 | 第54-55页 |
| 3.7.3.2 实时荧光PCR体系 | 第55页 |
| 3.7.4 RT-PCR数据分析 | 第55-56页 |
| 3.8 检测细胞ROS实验 | 第56-57页 |
| 3.8.1 ROS实验的原理 | 第56页 |
| 3.8.2 ROS检测实验步骤 | 第56-57页 |
| 3.9 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 | 第57-59页 |
| 3.9.1 实验原理 | 第57-58页 |
| 3.9.2 实验步骤 | 第58-59页 |
| 3.9.2.1 样品染色 | 第58页 |
| 3.9.2.2 样品分析 | 第58-59页 |
| 3.10 JC-10法检测线粒体膜电位 | 第59页 |
| 3.10.1 实验原理 | 第59页 |
| 3.10.2 实验步骤 | 第59页 |
| 3.11 BrdU掺入实验 | 第59-60页 |
| 3.12 透射电子显微镜材料准备以及统计方法 | 第60-62页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第62-80页 |
| 4.1 p21功能缺失对WS小鼠寿命的影响 | 第62-63页 |
| 4.1.1 实验结果 | 第62-63页 |
| 4.1.2 讨论 | 第63页 |
| 4.2 G4mTerc~(-/-)Wrn~(-/-)p21~(-/-)小鼠的胃部组织明显衰老迹象以及胃组织细胞增殖能力增强 | 第63-67页 |
| 4.2.1 实验结果 | 第63-66页 |
| 4.2.2 讨论 | 第66-67页 |
| 4.3 p21功能缺失导致WS小鼠胃窦组织细胞线粒体异常 | 第67-70页 |
| 4.3.1 实验结果 | 第67-68页 |
| 4.3.2 结果判定 | 第68页 |
| 4.3.3 讨论 | 第68-70页 |
| 4.4 p21缺失导致WS小鼠MEF细胞凋亡增强并引起细胞线粒体膜电位异常 | 第70-75页 |
| 4.4.1 实验结果 | 第70-74页 |
| 4.4.2 讨论 | 第74-75页 |
| 4.5 p21功能缺失使G3 mTere~(-/-)Wrn~(-/-)MEF细胞DNA损伤加重 | 第75-77页 |
| 4.5.1 实验结果 | 第75-76页 |
| 4.5.2 结果讨论 | 第76-77页 |
| 4.6 G3 mTerc~(-/-)Wrn~(-/-)p21~(-/-)MEF细胞增殖能力增强,活性氧族(ROS)有所下降 | 第77-80页 |
| 4.6.1 实验结果 | 第77-79页 |
| 4.6.2 结果讨论 | 第79-80页 |
| 第五章 总结与展望 | 第80-84页 |
| 5.1 总结 | 第80-81页 |
| 5.2 展望 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-101页 |
| 附录A 本人在硕士阶段发表的文章 | 第101页 |
