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重组人肝活素(HPS)的受体分离和确认研究

中文摘要第5-8页
Abstract第8-10页
前言第11-16页
第一章 材料与方法第16-26页
    1.1 实验材料与试剂第16页
        1.1.1 细胞系第16页
        1.1.2 实验动物第16页
        1.1.3 主要试剂第16页
    1.2 实验方法第16-26页
        1.2.1 细胞培养条件第16-17页
        1.2.2 HPS体外活性方法测定的建立第17-18页
        1.2.3 FITC荧光标记重组人肝活素HPS第18页
        1.2.4 FITC-HPS与L02细胞的结合第18页
        1.2.5 125I标记HPS第18页
        1.2.6 受体饱和实验第18-19页
        1.2.7 受体竞争实验第19页
        1.2.8 小鼠原代肝实质细胞的分离第19页
        1.2.9 BS3交联法第19页
        1.2.10 125I放射自显影第19-20页
        1.2.11 EGF、HGF与 125I-HPS竞争实验第20页
        1.2.12 细胞膜蛋白提取第20页
        1.2.13 细胞总蛋白提取第20-21页
        1.2.14 免疫印迹实验(Western Blot)第21页
        1.2.15 免疫共沉淀(CoIP)第21页
        1.2.16 RNA提取及Real time PCR检测第21-22页
        1.2.17 细胞质粒转染第22页
        1.2.18 小RNA转染第22页
        1.2.19 间接免疫(荧光共聚焦)第22页
        1.2.20 统计学分析第22页
        1.2.21 HPS的同源建模第22-24页
        1.2.22 HPS与ANXA2的对接研究第24页
        1.2.23 模型优化及分子动力学模拟第24页
        1.2.24 丙氨酸突变扫描第24-26页
第二章 结果与讨论第26-62页
    2.1 重组人肝活素(HPS)的鉴定第26-33页
        2.1.1 重组人肝活素(HPS)的理化性质及纯度鉴定第26-27页
        2.1.2 重组人肝活素(HPS)的生物学活性鉴定第27-33页
    2.2 重组人肝活素(HPS)肝源性细胞特异受体的鉴定第33-59页
        2.2.1 重组人肝活素(HPS)存在肝源性细胞特异性受体第33-42页
        2.2.2 重组人肝活素(HPS)受体鉴定第42-48页
        2.2.3 重组人肝活素(HPS)通过ANXA2发挥生物学功能第48-51页
        2.2.4 HPS与ANXA2在膜上共定位第51-52页
        2.2.5 HPS与ANXA2存在相互作用第52-53页
        2.2.6 生物信息学模拟HPS与ANXA2相互作用第53-59页
    2.3 讨论第59-62页
总结第62-63页
    一、主要研究成果第62页
    二、论文创新点第62页
    三、下一步工作计划第62-63页
附录第63-75页
    一、英文缩略词表第63-64页
    二、主要仪器设备第64-65页
    三、常用试剂、培养基的配制第65-67页
    三、SDS-PAGE进行分子量的测定分析第67页
    四、电喷雾质谱蛋白质分子量的测定分析第67-68页
    五、固相pH梯度( IPG)等电聚焦法(Bio-Rad手册)第68页
    六、氨基酸序列分析方法( OPA法)第68-70页
    七、Edman降解蛋白质N-末端氨基酸序列分析方法第70-71页
    八、C-末端氨基酸序列分析( 质谱法)第71-73页
    九、二硫键定性分析第73-75页
参考文献第75-80页
个人简历第80-81页
致谢第81页

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