中文摘要 | 第5-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
前言 | 第11-16页 |
第一章 材料与方法 | 第16-26页 |
1.1 实验材料与试剂 | 第16页 |
1.1.1 细胞系 | 第16页 |
1.1.2 实验动物 | 第16页 |
1.1.3 主要试剂 | 第16页 |
1.2 实验方法 | 第16-26页 |
1.2.1 细胞培养条件 | 第16-17页 |
1.2.2 HPS体外活性方法测定的建立 | 第17-18页 |
1.2.3 FITC荧光标记重组人肝活素HPS | 第18页 |
1.2.4 FITC-HPS与L02细胞的结合 | 第18页 |
1.2.5 125I标记HPS | 第18页 |
1.2.6 受体饱和实验 | 第18-19页 |
1.2.7 受体竞争实验 | 第19页 |
1.2.8 小鼠原代肝实质细胞的分离 | 第19页 |
1.2.9 BS3交联法 | 第19页 |
1.2.10 125I放射自显影 | 第19-20页 |
1.2.11 EGF、HGF与 125I-HPS竞争实验 | 第20页 |
1.2.12 细胞膜蛋白提取 | 第20页 |
1.2.13 细胞总蛋白提取 | 第20-21页 |
1.2.14 免疫印迹实验(Western Blot) | 第21页 |
1.2.15 免疫共沉淀(CoIP) | 第21页 |
1.2.16 RNA提取及Real time PCR检测 | 第21-22页 |
1.2.17 细胞质粒转染 | 第22页 |
1.2.18 小RNA转染 | 第22页 |
1.2.19 间接免疫(荧光共聚焦) | 第22页 |
1.2.20 统计学分析 | 第22页 |
1.2.21 HPS的同源建模 | 第22-24页 |
1.2.22 HPS与ANXA2的对接研究 | 第24页 |
1.2.23 模型优化及分子动力学模拟 | 第24页 |
1.2.24 丙氨酸突变扫描 | 第24-26页 |
第二章 结果与讨论 | 第26-62页 |
2.1 重组人肝活素(HPS)的鉴定 | 第26-33页 |
2.1.1 重组人肝活素(HPS)的理化性质及纯度鉴定 | 第26-27页 |
2.1.2 重组人肝活素(HPS)的生物学活性鉴定 | 第27-33页 |
2.2 重组人肝活素(HPS)肝源性细胞特异受体的鉴定 | 第33-59页 |
2.2.1 重组人肝活素(HPS)存在肝源性细胞特异性受体 | 第33-42页 |
2.2.2 重组人肝活素(HPS)受体鉴定 | 第42-48页 |
2.2.3 重组人肝活素(HPS)通过ANXA2发挥生物学功能 | 第48-51页 |
2.2.4 HPS与ANXA2在膜上共定位 | 第51-52页 |
2.2.5 HPS与ANXA2存在相互作用 | 第52-53页 |
2.2.6 生物信息学模拟HPS与ANXA2相互作用 | 第53-59页 |
2.3 讨论 | 第59-62页 |
总结 | 第62-63页 |
一、主要研究成果 | 第62页 |
二、论文创新点 | 第62页 |
三、下一步工作计划 | 第62-63页 |
附录 | 第63-75页 |
一、英文缩略词表 | 第63-64页 |
二、主要仪器设备 | 第64-65页 |
三、常用试剂、培养基的配制 | 第65-67页 |
三、SDS-PAGE进行分子量的测定分析 | 第67页 |
四、电喷雾质谱蛋白质分子量的测定分析 | 第67-68页 |
五、固相pH梯度( IPG)等电聚焦法(Bio-Rad手册) | 第68页 |
六、氨基酸序列分析方法( OPA法) | 第68-70页 |
七、Edman降解蛋白质N-末端氨基酸序列分析方法 | 第70-71页 |
八、C-末端氨基酸序列分析( 质谱法) | 第71-73页 |
九、二硫键定性分析 | 第73-75页 |
参考文献 | 第75-80页 |
个人简历 | 第80-81页 |
致谢 | 第81页 |