| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-18页 |
| 1.1 引言 | 第8页 |
| 1.2 木质纤维素的生物降解 | 第8-11页 |
| 1.2.1 木质纤维素 | 第8-9页 |
| 1.2.2 纤维素的酶解机制 | 第9-11页 |
| 1.2.3 纤维素酶解中的非水解因子 | 第11页 |
| 1.3 膨胀素及类膨胀素的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.3.1 膨胀素（Expansin）及其膨胀作用 | 第11-13页 |
| 1.3.2 微生物类膨胀素 | 第13页 |
| 1.3.3 真菌瑞氏木霉类膨胀素 Swollenin（TrSwol）的表达及功能研究 | 第13-14页 |
| 1.3.4 细菌枯草芽孢杆菌类膨胀素 BsEXLX1 的表达及功能研究 | 第14-15页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第15-17页 |
| 1.5 课题的提出及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基配置 | 第19-20页 |
| 2.1.5 电转化及转化子鉴定试剂配置 | 第20-21页 |
| 2.1.6 纤维素酶解试剂配置 | 第21页 |
| 2.1.7 蛋白电泳及 Western blot 试剂配置 | 第21-22页 |
| 2.1.8 Western blot 试剂配置 | 第22页 |
| 2.1.9 PCR 引物 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 重组质粒的提取及线性化 | 第23页 |
| 2.2.2 毕赤酵母感受态细胞的制备与电转化 | 第23-25页 |
| 2.2.3 高表达重组菌株的筛选 | 第25页 |
| 2.2.4 两种重组类膨胀素蛋白的优化表达 | 第25-26页 |
| 2.2.5 蛋白浓度的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.6 蛋白电泳分析 | 第27-28页 |
| 2.2.7 Western blotting 分析 | 第28-29页 |
| 2.2.8 重组类膨胀素蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 去糖基化分析 | 第30页 |
| 2.2.10 类膨胀素蛋白的功能特点研究 | 第30-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-53页 |
| 3.1 重组毕赤酵母表达载体的转化及高效表达菌株的筛选 | 第33-36页 |
| 3.2 TrSwol 的优化表达 | 第36-41页 |
| 3.2.1 pH 对 TrSwol 表达量的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.2 蛋白酶抑制剂对 TrSwol 表达量的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.3 蛋白酶抑制剂的补加方式对 TrSwol 表达量的影响 | 第38-41页 |
| 3.3 BsEXLX1 的表达优化 | 第41-45页 |
| 3.3.1 诱导时间和 pH 对 BsEXLX1 表达量的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2 蛋白酶抑制剂的补加方式对 BsEXLX1 表达量的影响 | 第42-45页 |
| 3.4 重组 TrSwol 和 BsEXLX1 的纯化及去糖基化分析 | 第45-46页 |
| 3.5 重组类膨胀素和内切纤维素酶在纤维素酶解时的协同作用 | 第46-53页 |
| 3.5.1 两种重组类膨胀素蛋白的协同活性的比较 | 第46-48页 |
| 3.5.2 两种重组类膨胀素蛋白的结合特性 | 第48-49页 |
| 3.5.3 两种重组类膨胀素蛋白的热稳定性 | 第49-50页 |
| 3.5.4 变性剂对两种重组类膨胀素蛋白协同活性的影响 | 第50-53页 |
| 第四章 结论与展望 | 第53-55页 |
| 4.1 结论 | 第53页 |
| 4.2 展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
