| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第13-23页 |
| 第一章 细胞周期蛋白H 的研究进展 | 第14-21页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 细胞周期蛋白家族 | 第14-16页 |
| ·细胞周期蛋白及其分类 | 第14页 |
| ·细胞周期蛋白的结构特点 | 第14-15页 |
| ·细胞周期蛋白与细胞周期调控 | 第15-16页 |
| 2 细胞周期蛋白H | 第16-21页 |
| ·细胞周期蛋白H 的进化分析 | 第16-17页 |
| ·细胞周期蛋白H 的结构 | 第17页 |
| ·细胞周期蛋白H 的生物学功能 | 第17-19页 |
| ·细胞周期蛋白H 与细胞周期蛋白依赖性激酶 | 第17-18页 |
| ·细胞周期蛋白H 与转录因子ⅡH | 第18-19页 |
| ·细胞周期蛋白H 与抑癌因子P53 | 第19页 |
| ·细胞周期蛋白H 与蛋白激酶CK2 | 第19页 |
| ·细胞周期蛋白H 亚型 | 第19-20页 |
| ·细胞周期蛋白H 的研究意义及展望 | 第20-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| ·BmCycH 基因的克隆表达和BmCycH 蛋白的组织细胞定位 | 第22页 |
| ·BmCycH 基因在家蚕中的转录与表达 | 第22-23页 |
| 第二部分 研究论文 | 第23-65页 |
| 第一章 BmCycH 基因的生物信息学分析 | 第24-65页 |
| 1 生物信息学工具 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-25页 |
| ·BmCycH 基因的获得 | 第24页 |
| ·BmCycH 基因的序列分析 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-30页 |
| ·BmCycH 基因的序列 | 第25页 |
| ·BmCycH 蛋白二级结构预测 | 第25-26页 |
| ·BmCycH 蛋白高级结构的预测 | 第26页 |
| ·BmCycH 蛋白的疏水性分析 | 第26-27页 |
| ·BmCycH 蛋白的信号肽分析 | 第27-28页 |
| ·BmCycH 蛋白的跨膜区预测 | 第28页 |
| ·BmCycH 蛋白定位的预测 | 第28页 |
| ·BmCycH 蛋白功能位点分析 | 第28-29页 |
| ·BmCycH 氨基酸序列同源性分析 | 第29-30页 |
| ·BmCycH 进化树的构建 | 第30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 BmCycH 基因的克隆 | 第32-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第32-33页 |
| ·材料与仪器 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·主要试剂的配置 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA 的试剂 | 第33页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第33页 |
| ·其它溶液 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-37页 |
| ·重组表达质粒的构建策略 | 第33-34页 |
| ·质粒提取 | 第34页 |
| ·PCR 扩增BmCycH 基因 | 第34页 |
| ·设计引物 | 第34页 |
| ·PCR 反应体系 | 第34页 |
| ·PCR 反应程序 | 第34页 |
| ·双酶切PCR 产物与pET-28a(+)载体 | 第34-35页 |
| ·纯化回收酶切产物 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·E.coli TG1、BL21（DE3）感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·挑选单菌落 | 第36页 |
| ·质粒的小量制备 | 第36页 |
| ·PCR 鉴定 | 第36页 |
| ·双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒DNA 序列分析鉴定 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增目的片段和重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒序列分析结果 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第40-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第40-41页 |
| ·包涵体处理试剂 | 第41页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-43页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第42页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·用N-十二烷基肌氨酸钠溶解包涵体沉淀 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的亲和层析 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 多克隆抗体的制备及其特性的研究 | 第46-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第46-47页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·试剂配制 | 第46-47页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第46页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第46-47页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第47页 |
| ·Western blotting 用试剂 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| ·抗体制备 | 第47-48页 |
| ·抗原制备 | 第47-48页 |
| ·免疫动物 | 第48页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第48页 |
| ·抗体的效价测定（ELISA 间接法） | 第48-49页 |
| ·抗体纯化 | 第49页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-51页 |
| ·抗体的效价测定 | 第49-50页 |
| ·抗体的纯化 | 第50-51页 |
| ·抗体的特异性检测 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 BmCycH 基因在家蚕中的转录与表达研究 | 第52-62页 |
| 1 材料和试剂 | 第52页 |
| ·材料与处理 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·试剂配制 | 第52页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第52页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-56页 |
| ·总RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·各时期各组织总RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·DNase I (RNase Free) Mix 去除总RNA 中的基因组DNA | 第53页 |
| ·反转录（Reversed Transcript，RT）反应 | 第53-54页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第54页 |
| ·荧光定量PCR | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第55页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第55-56页 |
| ·总蛋白质的提取 | 第55-56页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质含量 | 第56页 |
| ·Western blotting 检测BmCycH 蛋白的分布 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-60页 |
| ·家蚕不同发育时期mRNA 量的变化 | 第56-58页 |
| ·家蚕不同发育时期BmCycH 蛋白表达量的变化 | 第58页 |
| ·五龄幼虫各个组织mRNA 量的变化 | 第58-60页 |
| ·五龄幼虫各个组织BmCycH 蛋白表达量的变化 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 Bm CycH 蛋白亚细胞定位研究 | 第62-65页 |
| 1 材料和试剂 | 第62页 |
| ·材料与试剂 | 第62页 |
| ·试剂的配制 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
