| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 赤潮概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 赤潮的定义 | 第11页 |
| 1.1.2 赤潮的危害 | 第11-12页 |
| 1.1.3 中国赤潮概述 | 第12-13页 |
| 1.2 基因芯片 | 第13-14页 |
| 1.2.1 基因芯片的概念与原理 | 第13页 |
| 1.2.2 基因芯片分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 基因芯片的优缺点 | 第14页 |
| 1.2.4 低密度膜芯片 | 第14页 |
| 1.3 国内外研究现状及分析 | 第14-15页 |
| 1.3.1 国内研究现状 | 第14-15页 |
| 1.3.2 国外研究现状 | 第15页 |
| 1.4 课题意义 | 第15-16页 |
| 1.5 本文主要要研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 赤潮藻 LSUD1–D2 的 PCR 扩增、克隆和测序 | 第18-28页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 材料与方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 实验藻种与培养条件 | 第18页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.3 主要培养基及溶液配制 | 第19页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第19页 |
| 2.2.5 微藻基因组的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.6 DNA 质量检测 | 第20页 |
| 2.2.7 LSU rDNA 序列的 PCR 扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.8 扩增 DNA 的纯化回收 | 第21页 |
| 2.2.9 扩增 DNA 的 TA 克隆 | 第21页 |
| 2.2.10 序列分析 | 第21页 |
| 2.3 结果 | 第21-26页 |
| 2.3.1 基因组的提取与质量检验 | 第21-23页 |
| 2.3.2 LSU D1–D2 区基因的扩增 | 第23页 |
| 2.3.3 LSU D1–D2 区基因克隆阳性菌斑筛选 | 第23-24页 |
| 2.3.4 赤潮藻的序列测定结果 | 第24-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 第3章 探针的设计与特异性验证 | 第28-41页 |
| 3.1 前言 | 第28页 |
| 3.2 材料与方法 | 第28-33页 |
| 3.2.1 实验藻种与培养条件 | 第28-29页 |
| 3.2.2 主要试剂及溶液配制 | 第29页 |
| 3.2.3 寡核酸探针设计 | 第29页 |
| 3.2.4 探针的初筛 | 第29页 |
| 3.2.5 通用引物的设计 | 第29-30页 |
| 3.2.6 反向斑点杂交体系的建立 | 第30页 |
| 3.2.7 探针的复筛 | 第30-31页 |
| 3.2.8 应用斑点杂交对探针特异性进行检测 | 第31-33页 |
| 3.3 结果 | 第33-39页 |
| 3.3.1 探针初步设计结果 | 第33-34页 |
| 3.3.2 探针的初筛结果 | 第34-35页 |
| 3.3.3 通用引物设计结果 | 第35页 |
| 3.3.4 DIG 标记 PCR 产物 | 第35-36页 |
| 3.3.5 探针的反向斑点杂交测试结果 | 第36页 |
| 3.3.6 斑点杂交测试微藻的基因组提取 | 第36-38页 |
| 3.3.7 对 14 种微藻 DNA 的 LSU 亚基进行 PCR 扩增 | 第38页 |
| 3.3.8 探针特异性检测结果 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第4章 PCR–膜反向斑点杂交技术的优化 | 第41-54页 |
| 4.1 前言 | 第41页 |
| 4.2 材料与方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 实验藻种与培养条件 | 第41页 |
| 4.2.2 主要试剂及仪器 | 第41页 |
| 4.2.3 制备低密度膜芯片 | 第41-42页 |
| 4.2.4 紫外交联时间优化 | 第42页 |
| 4.2.5 探针上样量优化 | 第42页 |
| 4.2.6 DIG 标记产物加样量优化 | 第42-43页 |
| 4.2.7 杂交温度优化 | 第43页 |
| 4.2.8 杂交时间优化 | 第43页 |
| 4.2.9 洗膜温度优化 | 第43页 |
| 4.2.10 洗膜时间优化 | 第43页 |
| 4.2.11 杂交结果的处理 | 第43-44页 |
| 4.3 结果 | 第44-53页 |
| 4.3.1 紫外交联时间优化结果 | 第44-45页 |
| 4.3.2 探针上样量优化结果 | 第45-46页 |
| 4.3.3 DIG 标记产物加样量优化结果 | 第46-47页 |
| 4.3.4 杂交温度优化结果 | 第47-49页 |
| 4.3.5 杂交时间优化结果 | 第49-50页 |
| 4.3.6 洗膜温度优化结果 | 第50页 |
| 4.3.7 洗膜时间优化结果 | 第50-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 第5章 应用模拟自然水样和自然水样验证 PCR膜反向斑点杂交的实用性 | 第54-64页 |
| 5.1 前言 | 第54页 |
| 5.2 材料与方法 | 第54-56页 |
| 5.2.1 实验藻种与培养条件 | 第54页 |
| 5.2.2 主要试剂及仪器 | 第54页 |
| 5.2.3 PCR膜反向斑点杂检测极限测试–DNA 粗提液 | 第54-55页 |
| 5.2.4 PCR膜反向斑点杂检测极限测试–提纯基因组 DNA | 第55页 |
| 5.2.5 模拟自然水样实验 | 第55页 |
| 5.2.6 样品的不同的固定时间对 PCR膜反向斑点杂交检测的影响 | 第55页 |
| 5.2.7 PCR–膜反向斑点杂交检测技术对自然样品的检测 | 第55-56页 |
| 5.2.8 斑点像素值的处理 | 第56页 |
| 5.3 结果 | 第56-63页 |
| 5.3.1 PCR膜反向斑点杂检测极限测试–DNA 粗提液结果 | 第56-58页 |
| 5.3.2 PCR膜反向斑点杂检测极限测试–提纯基因组 DNA 结果 | 第58-59页 |
| 5.3.3 模拟自然水样结果 | 第59-61页 |
| 5.3.4 样品的不同的固定时间对 PCR膜反向斑点杂交检测的影响结果 | 第61-62页 |
| 5.3.5 PCR–膜反向斑点杂交检测技术对自然样品的检测结果 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63页 |
| 5.5 小结 | 第63-64页 |
| 第6章 基于ITS 序列PCR–膜反向斑点杂交技术的建立 | 第64-77页 |
| 6.1 前言 | 第64页 |
| 6.2 材料与方法 | 第64-68页 |
| 6.2.1 实验藻种与培养条件 | 第64-65页 |
| 6.2.3 对 10 种微藻的基因组的提取 | 第65页 |
| 6.2.4 对基因组的定量分析 | 第65页 |
| 6.2.5 对 10 种微藻的 ITS 区基因的扩增 | 第65-66页 |
| 6.2.6 对 10 种微藻的 ITS 区基因的克隆 | 第66页 |
| 6.2.7 特异性探针设计 | 第66-67页 |
| 6.2.8 探针特异性检测 | 第67页 |
| 6.2.9 低密度膜芯片的制备 | 第67-68页 |
| 6.3 结果 | 第68-75页 |
| 6.3.1 对 10 种微藻基因组的提取结果 | 第68-69页 |
| 6.3.2 对 10 种微藻的定量结果 | 第69-70页 |
| 6.3.3 对 10 种微藻的 ITS 区基因 PCR 扩增 | 第70-71页 |
| 6.3.4 ITS 区基因克隆阳性菌斑筛选 | 第71页 |
| 6.3.5 探针设计结果 | 第71-72页 |
| 6.3.6 对 10 种非目标微藻基因组 DNA 的提取 | 第72页 |
| 6.3.7 对 10 种非目标微藻 ITS 的 PCR 扩增 | 第72-74页 |
| 6.3.8 正向斑点杂交检测探针的特异性 | 第74-75页 |
| 6.3.9 制备低密度膜芯片 | 第75页 |
| 6.4 讨论 | 第75-76页 |
| 6.5 小结 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及其它成果 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
