| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 RNA 干扰技术及其研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 RNAi 技术的发现和发展 | 第12页 |
| 1.1.2 RNAi 的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 RNAi 的作用特点 | 第13-14页 |
| 1.1.4 RNAi 技术分类 | 第14页 |
| 1.1.5 RNAi 技术在植物遗传改良中的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 植物油的脂肪酸 | 第15-19页 |
| 1.2.1 植物脂肪酸合成途径 | 第15-18页 |
| 1.2.2 棉籽油的组分与脂肪酸合成 | 第18-19页 |
| 1.3 利用 RNAi 技术改良植物油分的研究 | 第19-21页 |
| 1.3.1 健康并稳定的高油酸植物油 | 第19-20页 |
| 1.3.2 特定用途的高硬脂酸油 | 第20页 |
| 1.3.3 植物油超长链脂肪酸 | 第20-21页 |
| 1.3.4 提高植物总油分含量 | 第21页 |
| 1.4 脂肪酸去饱和酶 FAD | 第21-23页 |
| 1.4.1 植物脂肪酸去饱和酶的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4.2 脂肪酸去饱和酶 FAD2 的研究进展 | 第22页 |
| 1.4.3 去饱和酶 FAD2 的作用机理 | 第22-23页 |
| 1.4.4 FAD2 基因与油酸含量 | 第23页 |
| 1.5 植物 Fat 研究进展 | 第23-26页 |
| 1.5.1 植物 Fat 基因的种类与特性 | 第24页 |
| 1.5.2 植物 Fat 基因的应用研究 | 第24-25页 |
| 1.5.3 FatB 基因与油酸含量 | 第25-26页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.1.3 试剂 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 烟草种子总 RNA 的提取（CTAB 法）： | 第28-29页 |
| 2.2.2 RNA 的质量检测 | 第29页 |
| 2.2.3 除去 RNA 中的基因组 DNA | 第29-30页 |
| 2.2.4 RNA 反转录为 cDNA 过程 | 第30页 |
| 2.2.5 植物基因组 DNA 的提取 | 第30-31页 |
| 2.3 植物表达干扰载体的构建 | 第31-37页 |
| 2.3.1 种子特异性启动子 SP 序列的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.2 FAD2-1 和 FatB 基因功能区域的克隆 | 第33页 |
| 2.3.3 棉花种子特异性 pBI121-SP 启动子载体的构建 | 第33页 |
| 2.3.4 pBI121-FAD2-1 片段中间载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.5 pBI121-FAD2-1-FatB 中间载体的构建 | 第34页 |
| 2.3.6 用 Gatway 技术构建双基因 RNA 干扰载体 | 第34-35页 |
| 2.3.7 特异性启动子双基因沉默载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.4 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第37-41页 |
| 2.4.1 根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.4.2 根癌农杆菌感受态的电击转化 | 第37页 |
| 2.4.3 烟草的遗传转化及鉴定 | 第37-39页 |
| 2.4.4 陆地棉 YZ-1 号 及新陆早 33 号的遗传转化 | 第39-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-58页 |
| 3.1 基因的克隆与分析 | 第41-43页 |
| 3.1.1 特异性启动子 SP 的克隆与分析 | 第41-42页 |
| 3.1.2 靶标基因功能区域片段的克隆 | 第42-43页 |
| 3.2 载体构建 | 第43-49页 |
| 3.2.1 种子特异性表达载体 pBI121-SP 启动子中间载体的构建验证 | 第43-44页 |
| 3.2.2 pBI121-FAD2-1 基因片段中间载体的验证 | 第44-45页 |
| 3.2.3 pBI121-FAD2-1-FatB 基因中间载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.4 用 Gatway 技术构建双基因 RNA 干扰载体 | 第46-47页 |
| 3.2.5 特异性启动子 RNAi 双基因沉默载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.6 表达干扰载体转化农杆菌 | 第48-49页 |
| 3.3 烟草遗传转化 | 第49-55页 |
| 3.3.1 烟草遗传转化过程 | 第49-50页 |
| 3.3.2 抗性烟草 PCR 验证 | 第50-51页 |
| 3.3.3 T0代转基因烟草的种子筛选 | 第51-53页 |
| 3.3.5 气相色谱（GC）检测脂肪酸成分及含量 | 第53-55页 |
| 3.4 棉花的遗传转化 | 第55-58页 |
| 3.4.1 抗性棉花的诱导和培养 | 第55-56页 |
| 3.4.2 胚性愈伤的 PCR 验证 | 第56-57页 |
| 3.4.3 抗性棉花的 PCR 验证 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 利用双基因的 RNA 干扰技术 | 第58页 |
| 4.2 种子特异性启动子代替组成型启动子 | 第58-59页 |
| 4.3 转基因烟草脂肪酸组分结果分析 | 第59页 |
| 4.4 烟草种子总 RNA 的提取 | 第59页 |
| 4.5 用农杆菌浸染棉花下胚轴 | 第59-61页 |
| 第五章 总结与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师评阅表 | 第73页 |
