| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 金针菇概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 金针菇的生物学特性 | 第13页 |
| 1.1.2 金针菇的产业现状 | 第13-14页 |
| 1.1.3 金针菇育种的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 巨大口蘑概述 | 第15-16页 |
| 1.2.1 巨大口蘑的生物学特性 | 第15页 |
| 1.2.2 巨大口蘑产业现状 | 第15-16页 |
| 1.3 原生质体育种技术研究进展 | 第16-22页 |
| 1.3.1 原生质体育种技术简介 | 第16页 |
| 1.3.2 原生质体育种技术在食用菌领域的应用 | 第16页 |
| 1.3.3 食用菌原生质体的制备和再生 | 第16-17页 |
| 1.3.4 食用菌原生质体诱变技术 | 第17页 |
| 1.3.5 食用菌原生质体融合技术 | 第17-19页 |
| 1.3.5.1 化学融合法 | 第17-18页 |
| 1.3.5.2 物理融合法 | 第18-19页 |
| 1.3.6 原生质体融合标记技术 | 第19-20页 |
| 1.3.6.1 形态学标记 | 第19页 |
| 1.3.6.2 营养缺陷型标记 | 第19-20页 |
| 1.3.6.3 灭活原生质体标记 | 第20页 |
| 1.3.6.4 荧光染色标记 | 第20页 |
| 1.3.6.5 抗药性标记 | 第20页 |
| 1.3.6.6 其他标记方法 | 第20页 |
| 1.3.7 融合子的筛选鉴定 | 第20-22页 |
| 1.3.7.1 遗传标记的检测 | 第21页 |
| 1.3.7.2 融合子的生物学鉴定 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的内容、目的与意义 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.4.2 研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.5 技术路线图 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.2 基础培养基 | 第25页 |
| 2.2 主要仪器设备及试剂 | 第25-28页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.3.1 菌株活化培养及生长速度测定 | 第28-29页 |
| 2.3.1.1 测定方法 | 第28页 |
| 2.3.1.2 金针菇及其单孢菌株菌丝生长速度的测定 | 第28页 |
| 2.3.1.3 巨大口蘑及其单孢菌株菌丝生长速度的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.2 菌株原生质体制备及再生 | 第29-30页 |
| 2.3.2.1 金针菇菌丝液体培养 | 第29页 |
| 2.3.2.2 巨大口蘑菌丝液体培养 | 第29页 |
| 2.3.2.3 酶液的配制 | 第29页 |
| 2.3.2.4 测定方法 | 第29页 |
| 2.3.2.5 金针菇原生质体制备的步骤 | 第29-30页 |
| 2.3.2.6 巨大口蘑原生质体制备的步骤 | 第30页 |
| 2.3.3 原生质体单核化程度的测定 | 第30页 |
| 2.3.3.1 测定方法 | 第30页 |
| 2.3.3.2 金针菇原生质体单核化比例测定 | 第30页 |
| 2.3.3.3 巨大口蘑原生质体单核化比例测定 | 第30页 |
| 2.3.4 亲本的选择 | 第30-31页 |
| 2.3.5 金针菇与巨大口蘑原生质体融合工艺优化 | 第31-32页 |
| 2.3.5.1 融合方法 | 第31页 |
| 2.3.5.2 融合率的计算 | 第31页 |
| 2.3.5.3 试验设计 | 第31-32页 |
| 2.3.6 融合菌株的筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.6.1 融合菌株的挑取与培养 | 第32页 |
| 2.3.6.2 菌落形态特征比较 | 第32页 |
| 2.3.6.3 融合菌株与亲本菌株的菌丝显微结构观察 | 第32页 |
| 2.3.6.4 拮抗实验 | 第32-33页 |
| 2.3.6.5 融合菌株与亲本菌丝生长速度比较 | 第33页 |
| 2.3.6.6 融合菌株与亲本袋栽培养生长速度比较 | 第33页 |
| 2.3.6.7 融合菌株与亲本液体发酵培养比较 | 第33页 |
| 2.3.7 融合菌株的ISSR鉴定 | 第33-36页 |
| 2.3.7.1 菌丝培养 | 第33-34页 |
| 2.3.7.2 液体发酵培养 | 第34页 |
| 2.3.7.3 基因组DNA的提取 | 第34页 |
| 2.3.7.4 基因组DNA电泳检测： | 第34-35页 |
| 2.3.7.5 ISSR-PCR扩增及电泳 | 第35-36页 |
| 2.3.7.6 数据分析 | 第36页 |
| 2.3.8 融合菌株的生物学特性研究 | 第36-38页 |
| 2.3.8.1 测定方法 | 第36页 |
| 2.3.8.2 最适碳源筛选 | 第36页 |
| 2.3.8.3 最适氮源筛选 | 第36页 |
| 2.3.8.4 融合菌株母种培养基优化 | 第36-38页 |
| 2.3.8.5 融合菌株原种培养基筛选 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-67页 |
| 3.1 金针菇及其单孢菌株菌丝生长速度比较 | 第38-39页 |
| 3.2 巨大口蘑及其单孢菌株菌丝生长速度比较 | 第39-40页 |
| 3.3 金针菇及其单孢菌株原生质体产量比较 | 第40页 |
| 3.4 巨大口蘑及其单孢菌株原生质体产量比较 | 第40-41页 |
| 3.5 原生质体单核化程度比较 | 第41-42页 |
| 3.5.1 金针菇及其单孢菌株原生质体单核化程度 | 第41页 |
| 3.5.2 巨大口蘑及其单孢菌株原生质体单核化程度 | 第41-42页 |
| 3.6 原生质体释放过程与方式 | 第42-43页 |
| 3.7 亲本的选择 | 第43页 |
| 3.8 金针菇与巨大口蘑融合工艺优化结果 | 第43-45页 |
| 3.9 原生质体融合观察 | 第45-46页 |
| 3.10 融合菌株的筛选 | 第46-53页 |
| 3.10.1 菌落形态观察 | 第46-47页 |
| 3.10.2 融合菌株与亲本菌株的菌丝显微结构观察 | 第47-49页 |
| 3.10.3 拮抗作用的观察 | 第49-50页 |
| 3.10.4 亲本及融合菌株生长速度比较 | 第50-51页 |
| 3.10.5 融合子袋栽培养生长速度比较 | 第51-52页 |
| 3.10.6 融合子与亲本液体发酵培养速度比较 | 第52-53页 |
| 3.10.7 融合菌株筛选结果 | 第53页 |
| 3.11 融合子的ISSR鉴定结果 | 第53-55页 |
| 3.11.1 融合子与亲本的ISSR分析 | 第53-54页 |
| 3.11.2 融合子与亲本的遗传相似系数 | 第54-55页 |
| 3.11.3 聚类分析 | 第55页 |
| 3.12 融合菌株生物学特性研究 | 第55-67页 |
| 3.12.1 融合菌株最适碳源选择 | 第55-56页 |
| 3.12.2 融合菌株最适氮源选择 | 第56页 |
| 3.12.3 融合菌株母种培养基优化结果 | 第56-64页 |
| 3.12.3.1 融合菌株R13母种培养基优化结果 | 第56-59页 |
| 3.12.3.2 融合菌株R14母种培养基优化结果 | 第59-62页 |
| 3.12.3.3 融合菌株R15母种培养基优化结果 | 第62-64页 |
| 3.12.4 融合菌株原种培养基的筛选结果 | 第64-67页 |
| 4 结论与讨论 | 第67-73页 |
| 4.1 结论 | 第67-68页 |
| 4.1.1 亲本的选择 | 第67页 |
| 4.1.2 金针菇与巨大口蘑原生质体融合最佳工艺 | 第67页 |
| 4.1.3 融合菌株的筛选与鉴定 | 第67-68页 |
| 4.1.3.1 融合菌株形态学观察 | 第67-68页 |
| 4.1.3.2 分子生物学鉴定 | 第68页 |
| 4.1.4 融合菌株生物学特性研究 | 第68页 |
| 4.1.4.1 融合菌株的平板培养基优化 | 第68页 |
| 4.1.4.2 融合菌株的原种培养基优化 | 第68页 |
| 4.2 讨论 | 第68-71页 |
| 4.2.1 原生质体的制备 | 第68-69页 |
| 4.2.2 亲本的选择 | 第69页 |
| 4.2.3 亲本灭活标记处理 | 第69-70页 |
| 4.2.4 原生质体的释放方式 | 第70页 |
| 4.2.5 融合子的筛选与鉴定 | 第70页 |
| 4.2.6 融合子的稳定性 | 第70-71页 |
| 4.3 创新之处及不足 | 第71页 |
| 4.4 展望 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
