| 英文缩写说明 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第1章 引言 | 第15-31页 |
| 1.1 研究背景 | 第15-25页 |
| 1.1.1 昆虫免疫系统 | 第15-17页 |
| 1.1.2 昆虫抗菌肽 | 第17-18页 |
| 1.1.3 昆虫抗真菌肽 | 第18页 |
| 1.1.4 家蚕抗菌肽 | 第18-19页 |
| 1.1.5 抗菌肽enbocin | 第19-20页 |
| 1.1.6 昆虫抗菌肽作用机制 | 第20-21页 |
| 1.1.7 病原真菌白僵菌 | 第21页 |
| 1.1.8 白僵菌对昆虫侵染及致死过程 | 第21-22页 |
| 1.1.9 昆虫对病原真菌的抵御 | 第22页 |
| 1.1.10 抗菌肽的表达调控机制 | 第22-25页 |
| 1.1.11 抗菌肽的应用 | 第25页 |
| 1.2 主要实验技术 | 第25-27页 |
| 1.2.1 实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 1.2.2 大肠杆菌表达系统 | 第26-27页 |
| 1.3 国内外研究现状 | 第27-29页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第29-31页 |
| 第2章 抗菌肽Enbocin1在抵御白僵菌感染过程中的表达特征 | 第31-47页 |
| 2.1 材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第31页 |
| 2.1.2 仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.3 试剂 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.2.1 菌种复壮 | 第34页 |
| 2.2.2 孢子悬液的制备 | 第34页 |
| 2.2.3 感染家蚕 | 第34-35页 |
| 2.2.4 家蚕总RNA提取 | 第35页 |
| 2.2.5 RNA的浓度测定 | 第35-36页 |
| 2.2.6 反转录cDNA反应 | 第36页 |
| 2.2.7 PCR反应及目的片段鉴定 | 第36-40页 |
| 2.2.8 Real-Time PCR反应 | 第40-41页 |
| 2.3 实验结果 | 第41-44页 |
| 2.3.1 家蚕总RNA提取 | 第41页 |
| 2.3.2 目的基因Enbocin1及家蚕β-Actin扩增、克隆及序列鉴定 | 第41页 |
| 2.3.3 Enbocin1在正常家蚕免疫相关组织器官中的表达 | 第41-42页 |
| 2.3.4 Enbocin1基因在家蚕感染白僵菌后的时空表达差异 | 第42-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第3章 家蚕抗菌肽Enbocin1的抗真菌活性及多克隆抗体制备 | 第47-65页 |
| 3.1 实验材料及试剂 | 第47-50页 |
| 3.1.1 材料 | 第47页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第47页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第47-50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-57页 |
| 3.2.1 家蚕总RNA提取 | 第50页 |
| 3.2.2 RNA浓度测定 | 第50页 |
| 3.2.3 反转录cDNA反应 | 第50页 |
| 3.2.4 Enbocin1基因ORF片段的扩增及鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.4.1 引物设计 | 第50页 |
| 3.2.4.2 PCR反应及目的片段鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.5 大肠杆菌重组表达载体的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.6 抽提重组表达质粒pET-30a(+)-Enbocin1 | 第52页 |
| 3.2.7 大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞制备 | 第52页 |
| 3.2.8 阳性菌株筛选及鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.9 小量诱导表达enbocin1重组蛋白 | 第53页 |
| 3.2.10 SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况 | 第53-54页 |
| 3.2.11 Western blot检测目的蛋白表达情况 | 第54-55页 |
| 3.2.12 大量诱导表达enbocin1重组蛋白及总蛋白提取 | 第55页 |
| 3.2.13 Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白enbocin1 | 第55-56页 |
| 3.2.14 enbocin 1 蛋白样品浓缩 | 第56页 |
| 3.2.15 enbocin1蛋白样品浓度测定 | 第56页 |
| 3.2.16 enbocin1重组蛋白抑菌活性鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.17 enbocin1多克隆抗体血清制备 | 第57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 3.3.1 目的基因Enbocin1 ORF片段扩增、克隆和序列测定 | 第57页 |
| 3.3.2 构建重组表达载体PET-30a(+)-enbocin1 | 第57-58页 |
| 3.3.3 重组蛋白enbocin1的表达、纯化和鉴定 | 第58-60页 |
| 3.3.4 enbocin1重组蛋白样品浓度测定 | 第60页 |
| 3.3.5 重组蛋白对白僵菌的活性鉴定 | 第60页 |
| 3.3.6 enbocin1多克隆抗体血清制备 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 附录1 | 第77-78页 |
| 附录2 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
