| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-22页 |
| 1.1 APA概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 mRNA选择性多聚腺苷酸化研究的发展历程 | 第9-10页 |
| 1.1.2 mRNA选择性多聚腺苷酸化的分子机制 | 第10-11页 |
| 1.1.3 APA的作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2 APA的真核生物的基因表达调控对肿瘤的作用 | 第12-14页 |
| 1.3 肺癌特效复方中药金复康的抗肿瘤分子机制研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 肺癌的研究现状 | 第14页 |
| 1.3.2 中药抑癌的分子机制的研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2.1 传统中药治疗 | 第14页 |
| 1.3.2.2 中医药治疗肿瘤的分子机制研究 | 第14-15页 |
| 1.3.3 金复康引起非小细胞肺癌系A549细胞凋亡 | 第15-17页 |
| 1.4 如何对复方中药金复康的抑癌机制进行基因表达调控水平的研究 | 第17-22页 |
| 1.4.1 研究的方法 | 第17-18页 |
| 1.4.2 3T-seq技术 | 第18-22页 |
| 1.4.2.1 技术简介 | 第18页 |
| 1.4.2.2 原理和流程示意图 | 第18-21页 |
| 1.4.2.3 技术的独特性 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-42页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第22页 |
| 2.2.2 制备金复康醇提物 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验试剂和材料 | 第23-24页 |
| 2.2.4 仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.5 引物与测序接头 | 第25-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.3.1.1 配制培养基 | 第27页 |
| 2.3.1.2 细胞旳培养 | 第27-28页 |
| 2.3.2 细胞总RNA的提取和质检 | 第28-29页 |
| 2.3.2.1 细胞总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.2.2 细胞总RNA的质量检测 | 第28-29页 |
| 2.3.3 APA文库构建 | 第29-41页 |
| 2.3.3.1 特殊Oligo dT磁珠的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3.2 Oligo dT逆转录筛选Poly(A)+mRNA | 第30-32页 |
| 2.3.3.3 双链cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 2.3.3.4 APA标签的精确定位 | 第33-34页 |
| 2.3.3.5 移除Poly A序列释放APA标签文库 | 第34-35页 |
| 2.3.3.6 文库修饰 | 第35-37页 |
| 2.3.3.7 片段筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.3.8 文库的克隆测序质检 | 第38-40页 |
| 2.3.3.9 文库扩增和片段精确筛选 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果 | 第42-54页 |
| 3.1 总RNA质检结果 | 第42-43页 |
| 3.2 文库质检结果 | 第43-44页 |
| 3.3 高通量文库的克隆质检结果 | 第44-45页 |
| 3.4 片段精确筛选 | 第45-46页 |
| 3.5 高通量测序结果比对 | 第46-48页 |
| 3.5.1 高通量测序质检结果 | 第46-48页 |
| 3.5.2 APA位点的鉴定和比对分析 | 第48页 |
| 3.6 数据初步分析 | 第48-50页 |
| 3.7 差异表达基因的功能分析 | 第50页 |
| 3.8 3T-seq高通量数据的验证 | 第50-52页 |
| 3.8.1 3'RACE验证3T-seq定位PAS的精准性 | 第50-51页 |
| 3.8.2 real-time RT PCR验证表达量差异 | 第51-52页 |
| 3.9 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 总结与展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
