| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第17-24页 |
| 1.1 研究背景 | 第17-22页 |
| 1.1.1 H.pylori简述 | 第17-18页 |
| 1.1.2 H.pylori cag致病岛研究现状 | 第18-19页 |
| 1.1.3 H.pylori CagA蛋白 | 第19-21页 |
| 1.1.4 H.pylori hp0521基因 | 第21-22页 |
| 1.2 本研究的目的、内容及技术路线 | 第22-24页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第22页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第22页 |
| 1.2.3 技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 H.pylori hp0521基因筛选及生物信息学分析 | 第24-45页 |
| 2.1 材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 临床患者的筛选和标本采集 | 第24页 |
| 2.1.2 标准菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.6 主要网站及相关分析软件 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 H.pylori的培养与鉴定 | 第27页 |
| 2.2.2 H.pylori基因组DNA的抽提 | 第27页 |
| 2.2.3 基因克隆引物的合成 | 第27-28页 |
| 2.2.4 聚合酶链式（PCR）反应 | 第28页 |
| 2.2.5 包含目的基因的PCR片段回收 | 第28-29页 |
| 2.2.6 感受态细菌细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.7 T-A连接实验 | 第29-30页 |
| 2.2.8 连接产物的转化 | 第30页 |
| 2.2.9 含目的基因大肠杆菌筛选鉴定 | 第30页 |
| 2.2.10 目的基因序列测序分析 | 第30页 |
| 2.2.11 生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-43页 |
| 2.3.1 H.pylori分离、培养、鉴定 | 第31页 |
| 2.3.2 基因PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.3 基因序列测序、分析、确定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 hp0521基因编码Cag2蛋白的基本理化性质分析 | 第33-34页 |
| 2.3.5 Cag2蛋白二级结构分析 | 第34-35页 |
| 2.3.6 Cag2蛋白三级结构预测 | 第35-36页 |
| 2.3.7 hp0521基因编码Cag2蛋白的信号肽预测 | 第36页 |
| 2.3.8 Cag2蛋白跨膜区域预测 | 第36-38页 |
| 2.3.9 Cag2蛋白功能结构域分析 | 第38-39页 |
| 2.3.10 Cag2蛋白质指纹图谱分析 | 第39-41页 |
| 2.3.11 hp0521基因系统进化树分析 | 第41-42页 |
| 2.3.12 hp0521基因与cagA基因 3，端可变区相关性分析 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 H.pylori hp0521基因表达 | 第45-58页 |
| 3.1 材料 | 第45-48页 |
| 3.1.1 动物、菌株、质粒和软件 | 第45-46页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第46-48页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第48页 |
| 3.2 方法 | 第48-53页 |
| 3.2.1 hp0521基因补全两个碱基（hpc0521）的合成 | 第48-49页 |
| 3.2.2 重组原核表达质粒的构建和鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.3 融合蛋白的诱导表达和全菌蛋白提取及Western Blot分析 | 第50-51页 |
| 3.2.4 Cag2蛋白抗原表位分析 | 第51页 |
| 3.2.5 Cag2多肽合成 | 第51页 |
| 3.2.6 兔抗Cag2蛋白抗体的制备及效价测定 | 第51-52页 |
| 3.2.7 标准H.pylori菌株全菌蛋白提取及Western Blot分析 | 第52-53页 |
| 3.3 结果 | 第53-56页 |
| 3.3.1 重组表达质粒pET-32a-hp0521和pET32a-hpc0521的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.2 重组表达质粒诱导表达后蛋白提取及Western Blot分析 | 第54-55页 |
| 3.3.3 Cag2多肽序列选择及合成 | 第55页 |
| 3.3.4 兔抗Cag2蛋白抗体效价测定 | 第55页 |
| 3.3.5 抗Cag2蛋白抗体与H.pylori全菌蛋白Western Blot分析 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 H.pylori hp0521基因缺失株构建 | 第58-65页 |
| 4.1 材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 菌株、载体及软件 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第58页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第58-59页 |
| 4.2 方法 | 第59-61页 |
| 4.2.1 细菌的培养 | 第59页 |
| 4.2.2 hp0521基因上、下游同源臂的扩增 | 第59页 |
| 4.2.3 hp0521基因重组自杀质粒的构建和鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2.4 hp0521基因缺失株的构建和鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3 结果 | 第61-63页 |
| 4.3.1 hp0521基因上、下游同源臂的PCR扩增 | 第61页 |
| 4.3.2 hp0521基因缺失重组自杀质粒的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.3.3 hp0521基因缺失株的鉴定 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 hp0521基因功能初步探讨 | 第65-77页 |
| 5.1 材料 | 第65-66页 |
| 5.1.1 菌株、细胞 | 第65页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 5.1.3 主要溶液配制 | 第65页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第65-66页 |
| 5.1.5 主要网站及软件 | 第66页 |
| 5.2 方法 | 第66-70页 |
| 5.2.1 H.pylori和细胞的培养 | 第66页 |
| 5.2.2 H.pylori生长情况OD（光密度）值测定 | 第66页 |
| 5.2.3 H.pylori总RNA的提取 | 第66-67页 |
| 5.2.4 总RNA的逆转录 | 第67页 |
| 5.2.5 H.pylori hp0521下游基因极化的影响 | 第67页 |
| 5.2.6 与hp0521基因相互作用基因预测及RT-PCR引物设计 | 第67-69页 |
| 5.2.7 hp0521基因与互作基因的荧光定量PCR | 第69页 |
| 5.2.8 H.pylori CagA蛋白表达量检测 | 第69页 |
| 5.2.9 hp0521基因缺失对其他重要cagPAI编码蛋白稳定性的影响 | 第69-70页 |
| 5.2.10 hp0521基因缺失对CagA转运的影响 | 第70页 |
| 5.2.11 hp0521基因缺失对诱导细胞分泌IL-8 的影响 | 第70页 |
| 5.3 结果 | 第70-75页 |
| 5.3.1 H.pylori生长曲线的绘制 | 第70-71页 |
| 5.3.2 H.pylori hp0521下游基因极化影响的PCR验证 | 第71-72页 |
| 5.3.3 hp0521基因与互作基因的荧光定量PCR验证 | 第72页 |
| 5.3.4 H.pylori CagA蛋白表达影响 | 第72-73页 |
| 5.3.5 hp0521基因缺失对cagPAI编码的其他蛋白稳定性影响 | 第73页 |
| 5.3.6 hp0521基因缺失对CagA蛋白转运的影响 | 第73-74页 |
| 5.3.7 hp0521基因缺失对IL-8 诱导分泌的影响 | 第74-75页 |
| 5.4 讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 主要结论及展望 | 第77-78页 |
| 6.1 主要结论 | 第77页 |
| 6.2 主要展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文和参加的课题 | 第86页 |
