摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
缩略语表 | 第11-12页 |
1 文献综述 | 第12-22页 |
1.1 油菜等油料作物高含油量形成的理论与实践 | 第12-13页 |
1.2 突变体库在油菜功能基因组学研究中的作用 | 第13-14页 |
1.3 突变体库的种类 | 第14-18页 |
1.3.1 突变体库的两大基本类型 | 第14-16页 |
1.3.2 FOX-hunting突变体库的应用 | 第16-17页 |
1.3.3 GATEWAY技术的工作原理 | 第17-18页 |
1.4 诱导型启动子的结构及其在基因功能研究中的意义 | 第18-20页 |
1.5 本研究目的与意义 | 第20-22页 |
1.5.1 本研究采取的技术路线 | 第20-21页 |
1.5.2 本研究的主要内容 | 第21-22页 |
2. 材料与方法 | 第22-34页 |
2.1 植物材料及培养条件 | 第22页 |
2.2 不同发育时期油菜种子cDNA文库构建方法 | 第22-27页 |
2.2.1 RNA提取 | 第22-23页 |
2.2.2 可诱导表达油菜基因的双元表达载体文库构建 | 第23-27页 |
2.3 两类文库评价的方法 | 第27-28页 |
2.3.1 cDNA测序 | 第27-28页 |
2.3.2 序列分析统计 | 第28页 |
2.4 拟南芥功能获得型突变体库的构建 | 第28-30页 |
2.4.1 农杆菌的转化 | 第28-29页 |
2.4.2 拟南芥遗传转化方法 | 第29-30页 |
2.4.3 转基因阳性苗的抗性筛选 | 第30页 |
2.5 被转化油菜基因的克隆及测序分析 | 第30页 |
2.6 表型的观察与验证方法 | 第30-31页 |
2.6.1 诱导表达与表型观察 | 第30-31页 |
2.6.2 突变体表型的重新确证及相关基因克隆 | 第31页 |
2.7 转基因株系种子含油量及脂肪酸组分的测定 | 第31-32页 |
2.7.1 脂肪酸提取方法 | 第31页 |
2.7.2 气相色谱分析脂肪酸组分和含油量的程序 | 第31-32页 |
2.8 转基因的诱导表达性检验 | 第32-34页 |
2.8.1 RNA的提取 | 第32页 |
2.8.2 RT-PCR | 第32-34页 |
3 结果与分析 | 第34-45页 |
3.1 油菜cDNA文库的构建与评价 | 第34-37页 |
3.1.1 中间载体文库的构建与评价 | 第34-37页 |
3.1.2 植物双元表达载体文库的构建 | 第37页 |
3.2 小容量拟南芥功能获得型突变体库的构建与评价 | 第37-39页 |
3.3 诱导导表达系统的验证 | 第39-40页 |
3.4 诱导表达后拟南芥转基因系种子含油量检测 | 第40-42页 |
3.5 小容量突变体库经诱导表达后的其它表型观察 | 第42-45页 |
3.5.1 肉眼可见表型变异的观察与验证 | 第42-43页 |
3.5.2 导致表型变异的油菜基因的克隆与序列分析 | 第43-45页 |
4 讨论 | 第45-51页 |
4.1 FL-cDNA超表达突变体库应用于油菜功能基因组学的可行性 | 第45-46页 |
4.2 FL-cDNA超表达突变体库可用于筛选油分累积相关基因 | 第46-47页 |
4.3 基因异位表达对表型的影响 | 第47-49页 |
4.4 诱导型启动子的优点 | 第49页 |
4.5 本拟南芥功能获得型突变体库在油菜育种中的应用前景 | 第49-51页 |
参考文献 | 第51-59页 |
致谢 | 第59页 |