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以拟南芥为宿主的小容量可诱导表达油菜种子基因的突变体库的构建与评价

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
缩略语表第11-12页
1 文献综述第12-22页
    1.1 油菜等油料作物高含油量形成的理论与实践第12-13页
    1.2 突变体库在油菜功能基因组学研究中的作用第13-14页
    1.3 突变体库的种类第14-18页
        1.3.1 突变体库的两大基本类型第14-16页
        1.3.2 FOX-hunting突变体库的应用第16-17页
        1.3.3 GATEWAY技术的工作原理第17-18页
    1.4 诱导型启动子的结构及其在基因功能研究中的意义第18-20页
    1.5 本研究目的与意义第20-22页
        1.5.1 本研究采取的技术路线第20-21页
        1.5.2 本研究的主要内容第21-22页
2. 材料与方法第22-34页
    2.1 植物材料及培养条件第22页
    2.2 不同发育时期油菜种子cDNA文库构建方法第22-27页
        2.2.1 RNA提取第22-23页
        2.2.2 可诱导表达油菜基因的双元表达载体文库构建第23-27页
    2.3 两类文库评价的方法第27-28页
        2.3.1 cDNA测序第27-28页
        2.3.2 序列分析统计第28页
    2.4 拟南芥功能获得型突变体库的构建第28-30页
        2.4.1 农杆菌的转化第28-29页
        2.4.2 拟南芥遗传转化方法第29-30页
        2.4.3 转基因阳性苗的抗性筛选第30页
    2.5 被转化油菜基因的克隆及测序分析第30页
    2.6 表型的观察与验证方法第30-31页
        2.6.1 诱导表达与表型观察第30-31页
        2.6.2 突变体表型的重新确证及相关基因克隆第31页
    2.7 转基因株系种子含油量及脂肪酸组分的测定第31-32页
        2.7.1 脂肪酸提取方法第31页
        2.7.2 气相色谱分析脂肪酸组分和含油量的程序第31-32页
    2.8 转基因的诱导表达性检验第32-34页
        2.8.1 RNA的提取第32页
        2.8.2 RT-PCR第32-34页
3 结果与分析第34-45页
    3.1 油菜cDNA文库的构建与评价第34-37页
        3.1.1 中间载体文库的构建与评价第34-37页
        3.1.2 植物双元表达载体文库的构建第37页
    3.2 小容量拟南芥功能获得型突变体库的构建与评价第37-39页
    3.3 诱导导表达系统的验证第39-40页
    3.4 诱导表达后拟南芥转基因系种子含油量检测第40-42页
    3.5 小容量突变体库经诱导表达后的其它表型观察第42-45页
        3.5.1 肉眼可见表型变异的观察与验证第42-43页
        3.5.2 导致表型变异的油菜基因的克隆与序列分析第43-45页
4 讨论第45-51页
    4.1 FL-cDNA超表达突变体库应用于油菜功能基因组学的可行性第45-46页
    4.2 FL-cDNA超表达突变体库可用于筛选油分累积相关基因第46-47页
    4.3 基因异位表达对表型的影响第47-49页
    4.4 诱导型启动子的优点第49页
    4.5 本拟南芥功能获得型突变体库在油菜育种中的应用前景第49-51页
参考文献第51-59页
致谢第59页

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