| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 脂肪酶简介 | 第12-18页 |
| 1.1.1 脂肪酶定义 | 第12页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构基础及催化机制 | 第12-17页 |
| 1.1.3 脂肪酶的磷脂酶活性 | 第17页 |
| 1.1.4 脂肪酶的分子改造 | 第17-18页 |
| 1.2 HL1232脂肪酶简介 | 第18-20页 |
| 1.2.1 HL1232脂肪酶的蛋白序列信息 | 第18-19页 |
| 1.2.2 HL1232脂肪酶的结构基础 | 第19页 |
| 1.2.3 HL1232脂肪酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 立题背景与意义 | 第20-21页 |
| 1.4 研究内容及研究路线 | 第21-23页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第21页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章“盖子”区域带电荷氨基酸对HL1232脂肪酶酶学性质的影响研究 | 第23-48页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第23-28页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.2.2 试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 常用实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 培养基及溶液的配制 | 第25-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.3.1 突变体设计 | 第28页 |
| 2.3.2 突变体表达载体构建 | 第28-33页 |
| 2.3.3 HL1232脂肪酶突变体的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.4 HL1232脂肪酶突变体酶学性质测定 | 第34-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-47页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第36-37页 |
| 2.4.2 HL1232脂肪酶突变体大肠杆菌DH5a菌株的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4.3 HL1232脂肪酶突变体毕赤酵母X-33 表达菌株的筛选与鉴定 | 第38页 |
| 2.4.4 HL1232脂肪酶突变体的表达与纯化 | 第38-39页 |
| 2.4.5 脂肪酶HL1232突变体最适反应pH测定 | 第39-42页 |
| 2.4.6 HL1232脂肪酶突变体最适反应温度测定 | 第42-44页 |
| 2.4.7 HL1232脂肪酶“盖子”区域带电荷氨基酸残基酶学性质汇总 | 第44-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 C-端肽链在HL1232脂肪酶底物选择性中的作用研究 | 第48-61页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.3.1 突变体设计 | 第48-49页 |
| 3.3.2 突变体表达载体构建、发酵表达及纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.3 突变体酶学性质测定 | 第50页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第50-60页 |
| 3.4.1 引物设计 | 第50页 |
| 3.4.2 HL1232脂肪酶突变体大肠杆菌DH5a菌株的筛选与鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4.3 HL1232脂肪酶突变体毕赤酵母X-33 表达菌株的筛选与鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.4 HL1232脂肪酶突变体的表达与纯化 | 第52-53页 |
| 3.4.5 脂肪酶HL1232突变体最适反应pH测定 | 第53-56页 |
| 3.4.6 HL1232脂肪酶突变体最适反应温度测定 | 第56-58页 |
| 3.4.7 脂肪酶HL1232 C-端肽链定向改造突变体酶学性质结果总结 | 第58-60页 |
| 3.5 本章小节 | 第60-61页 |
| 第四章 HL1232脂肪酶及其突变体生物信息学分析 | 第61-75页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 HL1232脂肪酶生物信息学分析及模型构建 | 第61-65页 |
| 4.2.1 HL1232脂肪酶氨基酸序列分析 | 第61-63页 |
| 4.2.2 HL1232脂肪酶模型构建 | 第63-64页 |
| 4.2.3 HL1232脂肪酶模型评估 | 第64-65页 |
| 4.3 HL1232脂肪酶“盖子”区域与其酶活力关系 | 第65-71页 |
| 4.3.1“盖子”区域突变体与野生型酶活力对比 | 第65页 |
| 4.3.2“盖子”区域突变体结构分析 | 第65-71页 |
| 4.4 C-端肽链与HL1232脂肪酶磷脂酶活力关系 | 第71-73页 |
| 4.4.1 C-端肽链定向改造相关突变体与野生型酶学性质对比 | 第71-72页 |
| 4.4.2 C-端肽链在脂肪酶HL1232水解磷脂底物作用中的生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 结论与展望 | 第75-77页 |
| 结论 | 第75页 |
| 创新点 | 第75页 |
| 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
