| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 氨基糖苷类抗生素概述 | 第15-16页 |
| 1.2 氨基糖苷类抗菌机理 | 第16页 |
| 1.3 2-DOS氨基糖苷类抗生素及其生物合成途径 | 第16-18页 |
| 1.3.1 2-DOS氨基糖苷类抗生素的的合成前体物 | 第16-17页 |
| 1.3.2 新霉素生物合成相关基因 | 第17-18页 |
| 1.4 卡那霉素概述 | 第18-22页 |
| 1.4.1 卡那霉素B概述 | 第19页 |
| 1.4.2 卡那霉素生物合成途径 | 第19-22页 |
| 1.5 菌种的诱变育种 | 第22-23页 |
| 1.6 分子育种 | 第23-24页 |
| 1.7 论文工作目的意义及创新点 | 第24-25页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验试剂、仪器、工具酶 | 第26页 |
| 2.1.4 缓冲液 | 第26页 |
| 2.1.5 实验所用引物 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 E.coli质粒小量提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 链霉菌总DNA小量提取 | 第28页 |
| 2.2.3 PCR反应 | 第28-30页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳和DNA片段回收 | 第30-31页 |
| 2.2.5 DNA酶切 | 第31页 |
| 2.2.6 DNA连接 | 第31-32页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态制备 | 第32页 |
| 2.2.8 DNA转化大肠杆菌 | 第32页 |
| 2.2.9 接合转移实验 | 第32-33页 |
| 2.2.10 卡那链霉菌发酵 | 第33页 |
| 2.2.11 卡那链霉菌发酵液检测 | 第33-34页 |
| 2.2.12 卡那链霉菌诱变育种 | 第34-35页 |
| 第三章 原生质体再生法选育卡那霉素B高产菌株 | 第35-41页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 出发菌株筛选 | 第35-36页 |
| 3.3 原生质体诱变选育抗反馈抑制突变菌株 | 第36-40页 |
| 3.3.1 实验条件的选择 | 第36-39页 |
| 3.3.2 原生质体诱变选育抗反馈抑制突变菌株 | 第39页 |
| 3.3.3 突变株的遗传稳定性实验 | 第39-40页 |
| 3.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 基因工程技术构建卡那霉素B高产菌株 | 第41-75页 |
| 4.1 接合转移体系的构建 | 第41-44页 |
| 4.1.1 接合转移质粒的验证 | 第41-42页 |
| 4.1.2 接合转移培养基 | 第42-43页 |
| 4.1.3 抗生素覆盖时间 | 第43-44页 |
| 4.1.4 热激温度 | 第44页 |
| 4.2 pSET152整合功能的验证 | 第44-45页 |
| 4.3 neo8基因的整合 | 第45-54页 |
| 4.3.1 载体的构建 | 第46-49页 |
| 4.3.2 质粒电转化E coli ET12567(pUZ8002) | 第49-50页 |
| 4.3.3 接合转移实验 | 第50-51页 |
| 4.3.4 接合子发酵验证 | 第51-52页 |
| 4.3.5 新表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.4 kanJ基因的阻断 | 第54-65页 |
| 4.4.1 pSET152质粒的改造 | 第55-56页 |
| 4.4.2 阻断载体的构建 | 第56-63页 |
| 4.4.3 pWZ3电转化E.coli ET12567(pUZ8002) | 第63-64页 |
| 4.4.4 接合转移实验 | 第64-65页 |
| 4.5 kanF敲除载体 | 第65-73页 |
| 4.5.1 载体构建 | 第65-69页 |
| 4.5.2 新载体构建 | 第69-73页 |
| 4.6 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 附录 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第87-89页 |
| 作者及导师简介 | 第89-90页 |
| 附件 | 第90-91页 |
