| 提要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 构建目的基因的原核表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第11-12页 |
| 1.2 重组蛋白纯化 | 第12页 |
| 1.3 SIRT1/2/3 的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.3.1 Sirtuin家族成员的发现、分类及细胞定位 | 第12-14页 |
| 1.3.2 Sirtuin蛋白家族结构特点及催化机制 | 第14-15页 |
| 1.3.3 SIRT1/2/3 的生物学功能 | 第15-17页 |
| 1.3.4 Sirtuin激活剂与抑制剂 | 第17-19页 |
| 1.4 本论文的研究目的、方法、意义和技术路线 | 第19-21页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究方法 | 第20页 |
| 1.4.3 研究意义 | 第20页 |
| 1.4.4 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 目的基因SIRT1/2/3 的PCR扩增及原核表达载体的构建 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第22-24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 SIRT1/2/3 基因片段的扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.2 pET28a-SIRT1/2/3 表达载体的构建 | 第26-30页 |
| 2.2.3 SIRT1/2/3 重组蛋白的制备(少量) | 第30-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-33页 |
| 2.3.1 SIRT1/2/3 基因片段的扩增及序列分析 | 第32页 |
| 2.3.2 重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 SIRT1/2/3 重组蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 SIRT1/2/3 重组蛋白的表达、纯化和鉴定 | 第35-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.2 主要溶液配制 | 第35-37页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 重组蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| 3.2.2 重组蛋白的纯化(纯化过程蛋白溶液均需置于冰上操作) | 第38-42页 |
| 3.2.3 Bradford法测蛋白浓度 | 第42-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-44页 |
| 3.3.1 重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 3.3.2 重组蛋白的浓度测定 | 第43-44页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 SIRT1/2/3 酶活性测定方法的建立 | 第45-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.2 主要溶液配制 | 第45-46页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 酶催化反应 | 第46页 |
| 4.2.2 胰酶终止反应 | 第46-47页 |
| 4.3 实验结果 | 第47-49页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 化合物的筛选评价 | 第51-55页 |
| 5.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第51页 |
| 5.1.2 主要溶液配制 | 第51-52页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52页 |
| 5.2.1 酶催化反应 | 第52页 |
| 5.2.2 胰酶终止反应 | 第52页 |
| 5.3 实验结果 | 第52-54页 |
| 5.4 分析与讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 小结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 发表论文 | 第64-67页 |
