| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 克罗诺杆菌概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 克罗诺杆菌的生物学特性 | 第9页 |
| 1.1.2 克罗诺杆菌的致病性及危害 | 第9-11页 |
| 1.1.3 克罗诺杆菌的分型及污染来源 | 第11-12页 |
| 1.2 克罗诺杆菌检测技术研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 生理生化法 | 第12-13页 |
| 1.2.2 分子学检测法 | 第13-14页 |
| 1.2.3 免疫学检测法 | 第14-15页 |
| 1.3 细菌外膜蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 外膜蛋白的组成、结构和功能 | 第15-16页 |
| 1.3.2 外膜蛋白的致病性和免疫性 | 第16页 |
| 1.3.3 外膜蛋白的应用和前景 | 第16-17页 |
| 1.4 论文研究的目的及意义 | 第17页 |
| 1.5 论文研究的主要内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1.1 实验菌株及载体 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.6 溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 阪崎克罗诺杆菌的培养 | 第24页 |
| 2.2.2 阪崎克罗诺杆菌的表面蛋白特异性基因序列查找 | 第24页 |
| 2.2.3 阪崎克罗诺杆菌特异性基因序列的验证 | 第24-25页 |
| 2.2.4 阪崎克罗诺杆菌特异性基因的重组表达 | 第25-28页 |
| 2.2.5 特异性基因的蛋白表达及表达产物检测 | 第28-31页 |
| 2.2.6 多克隆抗体的制备 | 第31-34页 |
| 2.2.7 双抗夹心ELISA检测方法的建立 | 第34-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-60页 |
| 3.1 阪崎克罗诺杆菌的表面蛋白特异性基因的确定 | 第37页 |
| 3.1.1 特异性表面蛋白的确定 | 第37页 |
| 3.1.2 特异性基因序列的确定 | 第37页 |
| 3.2 基因A和基因B基因序列的特异性验证 | 第37-41页 |
| 3.2.1 30株Cronbacter sakazakii种内PCR验证 | 第37-38页 |
| 3.2.2 6株Cronbacter非sakazakii属内PCR验证 | 第38-40页 |
| 3.2.3 14株非Cronbacter PCR验证 | 第40-41页 |
| 3.3 A蛋白的基因重组表达 | 第41-45页 |
| 3.3.1 A基因的重组质粒构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 A蛋白诱导表达及SDS-PAGE | 第42-43页 |
| 3.3.3 A蛋白的可溶性表达检测 | 第43页 |
| 3.3.4 A重组蛋白表达条件优化 | 第43-44页 |
| 3.3.5 A蛋白纯化 | 第44-45页 |
| 3.4 B蛋白的基因重组表达 | 第45-49页 |
| 3.4.1 B基因的重组质粒构建 | 第45-46页 |
| 3.4.2 B蛋白诱导表达及SDS-PAGE | 第46页 |
| 3.4.3 B蛋白的可溶性表达检测 | 第46-47页 |
| 3.4.4 B重组蛋白表达条件优化 | 第47-49页 |
| 3.4.5 B蛋白纯化 | 第49页 |
| 3.5 多克隆抗体的制备 | 第49-50页 |
| 3.5.1 免疫后抗血清效价测定 | 第49-50页 |
| 3.5.2 抗体浓度及效价的测定 | 第50页 |
| 3.6 双抗夹心ELISA法的初步建立 | 第50-56页 |
| 3.6.1 捕获抗体包被量与检测抗体稀释倍数的初步优化 | 第50-51页 |
| 3.6.2 捕获抗体包被量优化 | 第51-52页 |
| 3.6.3 检测抗体稀释倍数的优化 | 第52页 |
| 3.6.4 封闭液种类的优化 | 第52-53页 |
| 3.6.5 封闭液浓度的优化 | 第53-54页 |
| 3.6.6 酶标二抗稀释倍数的优化 | 第54页 |
| 3.6.7 双抗夹心ELISA检测方法标准曲线的绘制 | 第54-55页 |
| 3.6.8 双抗夹心ELISA检测阪崎克罗诺杆菌的检测限和定量限 | 第55页 |
| 3.6.9 双抗夹心ELISA检测方法的重复性 | 第55-56页 |
| 3.7 特异性验证 | 第56-57页 |
| 3.8 讨论 | 第57-60页 |
| 3.8.1 特异性序列筛选比对 | 第57页 |
| 3.8.2 Linker的作用 | 第57-58页 |
| 3.8.3 蛋白表达及纯化 | 第58页 |
| 3.8.4 实验动物的选择 | 第58页 |
| 3.8.5 双抗夹心ELISA法的初步建立 | 第58-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 5 展望 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-70页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 8 致谢 | 第71页 |
