| 博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第18-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-42页 |
| 1.1 CarD蛋白的研究进展 | 第19-32页 |
| 1.1.1 HMGA的基因结构 | 第19-20页 |
| 1.1.2 HMGA的主要特征 | 第20-22页 |
| 1.1.3 HMGA的转录后修饰 | 第22-23页 |
| 1.1.4 真核生物HMGA的功能 | 第23-24页 |
| 1.1.5 原核生物类HMGA蛋白CarD的结构特征 | 第24-27页 |
| 1.1.6 CarD蛋白N端结构域TRCF的功能 | 第27-29页 |
| 1.1.7 CarD蛋白的功能 | 第29-30页 |
| 1.1.8 CarD调控的严谨反应 | 第30-31页 |
| 1.1.9 CarD的调控机制 | 第31-32页 |
| 1.2 耐辐射异常球菌的研究进展 | 第32-40页 |
| 1.2.1 耐辐射异常球菌的结构特征 | 第33-34页 |
| 1.2.2 耐辐射异常球菌的遗传转化 | 第34-35页 |
| 1.2.3 耐辐射异常球菌的系统进化分析 | 第35页 |
| 1.2.4 耐辐射异常球菌极端抗性 | 第35-37页 |
| 1.2.5 耐辐射异常球菌转录调控因子研究进展 | 第37-40页 |
| 1.3 立题依据和技术路线 | 第40-42页 |
| 1.3.1 立题依据 | 第40-41页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第41-42页 |
| 第二章 CarD结构和功能 | 第42-67页 |
| 2.1 材料与方法 | 第42-50页 |
| 2.1.1 菌株，质粒 | 第42-43页 |
| 2.1.2 酶类和生化试剂 | 第43页 |
| 2.1.3 培养基 | 第43-44页 |
| 2.1.4 实验仪器与设备 | 第44页 |
| 2.1.5 细菌基因组和质粒的提取 | 第44页 |
| 2.1.6 引物设计及PCR反应 | 第44-46页 |
| 2.1.7 PCR产物纯化或琼脂糖回收 | 第46页 |
| 2.1.8 酶切和连接 | 第46-47页 |
| 2.1.9 E.coli热激转化 | 第47页 |
| 2.1.10 耐辐射异常球菌感受态的制备和线性转化 | 第47-48页 |
| 2.1.11 △carD回补菌株的构建 | 第48页 |
| 2.1.12 正常培养条件下耐辐射异常球菌生长曲线测定 | 第48-49页 |
| 2.1.13 正常培养条件下大肠杆菌生长曲线测定 | 第49页 |
| 2.1.14 UV辐照条件下菌株的生长 | 第49页 |
| 2.1.15 48℃处理条件下菌株的生长 | 第49-50页 |
| 2.1.16 过氧化氢冲击下菌株的生长 | 第50页 |
| 2.1.17 乙醇冲击下细菌的生长 | 第50页 |
| 2.2 结果和分析 | 第50-64页 |
| 2.2.1 CarD保守结构域和系统进化分析 | 第50-54页 |
| 2.2.2 非生物胁迫诱导carD基因的表达 | 第54-55页 |
| 2.2.3 carD突变株构建和验证 | 第55-58页 |
| 2.2.4 △carD回补菌株的构建和验证 | 第58页 |
| 2.2.5 carD基因在D.radiodurans和E.coli过表达菌株的构建 | 第58-59页 |
| 2.2.6 carD基因的缺失和过量表达对菌株生长的影响 | 第59页 |
| 2.2.7 carD基因缺失增强菌株对UV辐射的耐受性 | 第59-60页 |
| 2.2.8 carD基因缺失增强菌株对H_2O2敏感 | 第60页 |
| 2.2.9 carD基因缺失增强了菌株对热冲击的敏感 | 第60-62页 |
| 2.2.10 carD基因的缺失减弱菌株对乙醇的耐受性 | 第62页 |
| 2.2.11 CarD蛋白的N端和C端保守结构域具有功能 | 第62-63页 |
| 2.2.12 carD减弱了E.coli的非生物胁迫抗性 | 第63-64页 |
| 2.3 讨论 | 第64-67页 |
| 2.3.1 CarD结构与报道菌株的CarD的异同 | 第64-65页 |
| 2.3.2 耐辐射菌CarD调控机制推测 | 第65-67页 |
| 第三章 CarD调控机制 | 第67-101页 |
| 3.1 材料与方法 | 第67-77页 |
| 3.1.0 菌株，质粒和试剂 | 第67-68页 |
| 3.1.1 酶类和生化试剂 | 第68页 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 | 第68-69页 |
| 3.1.3 培养基 | 第69页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第69-73页 |
| 3.1.5 细菌基因组和质粒的提取 | 第73页 |
| 3.1.6 引物设计及PCR反应 | 第73页 |
| 3.1.7 PCR产物纯化或琼脂糖回收 | 第73页 |
| 3.1.8 酶切和连接 | 第73页 |
| 3.1.9 E.coli热激转化 | 第73-74页 |
| 3.1.10 酵母双杂 | 第74-75页 |
| 3.1.11 比较蛋白质组学分析 | 第75-76页 |
| 3.1.12 CHIP实验流程 | 第76-77页 |
| 3.2 CarD与RNA聚合酶β'亚基互作 | 第77-80页 |
| 3.2.1 CarD和ropB'酵母双杂载体构建 | 第77-79页 |
| 3.2.2 CarD与ropB'互作 | 第79-80页 |
| 3.3 CarD抑制16S rRNA表达 | 第80-86页 |
| 3.3.1 耐辐射异常球菌16S rRNA分析 | 第80页 |
| 3.3.2 16S rRNA启动子-lacZ载体的构建和β-半乳糖苷酶酶活测定 | 第80-83页 |
| 3.3.3 16S rRNA过表达菌株的构建 | 第83-84页 |
| 3.3.4 16S rRNA过表达菌株的非生物胁迫抗性 | 第84-86页 |
| 3.4 CarD调控rel基因的表达 | 第86-97页 |
| 3.4.1 Rel保守结构域分析 | 第86-89页 |
| 3.4.2 relA/relQ单突变和双突变的构建 | 第89-90页 |
| 3.4.3 relA和relQ基因缺失菌株对氧化、热胁迫敏感 | 第90-92页 |
| 3.4.4 relA和relQ基因缺失菌株对营养胁迫敏感 | 第92-93页 |
| 3.4.5 H_2O_2处理条件下relA突变株比较蛋白质学分析 | 第93-95页 |
| 3.4.6 relA基因受CarD调控 | 第95-97页 |
| 3.5 讨论 | 第97-101页 |
| 3.5.1 耐辐射异常球菌CarD蛋白参与营养胁迫反应的调控作用 | 第97-99页 |
| 3.5.2 与已报道CarD调控方式的异同 | 第99-101页 |
| 第四章 全文结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 附录 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 作者简历 | 第116页 |
