| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 MTSase和MTHase的概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 MTSase和MTHase的来源 | 第9-10页 |
| 1.1.2 MTSase和MTHase结构和功能 | 第10-11页 |
| 1.2 海藻糖的概述 | 第11-14页 |
| 1.2.1 海藻糖的结构、性质和功能 | 第11-12页 |
| 1.2.2 海藻糖的制备方法 | 第12-13页 |
| 1.2.3 海藻糖的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 提高E.coli可溶性表达胞内重组蛋白研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第15页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌种、质粒及基因 | 第17页 |
| 2.1.2 药品及试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 培养基 | 第20-21页 |
| 2.2 基因工程相关操作方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 基因优化及合成 | 第21页 |
| 2.2.2 质粒抽提 | 第21页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建及鉴定 | 第21-23页 |
| 2.2.4 E.coli感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.5 E.coli感受态细胞的热激转化 | 第23页 |
| 2.2.6 B.brevis感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.7 B.brevis感受态细胞的电击转化 | 第23-24页 |
| 2.3 发酵方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 重组E.coli摇瓶发酵 | 第24页 |
| 2.3.2 重组E.coli Origami(DE3) 3L罐发酵优化 | 第24页 |
| 2.3.3 重组B.brevis摇瓶发酵培养 | 第24-25页 |
| 2.3.4 重组B.brevis 3L罐发酵 | 第25页 |
| 2.4 分析方法 | 第25-27页 |
| 2.4.1 菌体浓度（OD600）的测定 | 第25页 |
| 2.4.2 菌体细胞干重（DCW）的测定 | 第25页 |
| 2.4.3 重组蛋白酶活力的测定 | 第25-26页 |
| 2.4.4 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第26页 |
| 2.4.5 重组蛋白的分离纯化 | 第26页 |
| 2.4.6 重组蛋白的酶学性质研究 | 第26-27页 |
| 2.5 双酶法制备海藻糖的条件优化 | 第27-29页 |
| 2.5.1 添加酶普鲁兰酶 | 第27页 |
| 2.5.2 加酶量、温度、pH和底物浓度等条件优化 | 第27页 |
| 2.5.3 酶转化产物检测 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-52页 |
| 3.1 S. acidocaldarius ATCC 33909 MTSase、MTHase在E. coli中的重组表达和酶学性质研究 | 第29-40页 |
| 3.1.1 MTSase、MTHase在E.coli BL21(DE3)中的重组表达 | 第29-31页 |
| 3.1.2 提高MTSase、MTHase可溶性表达策略 | 第31-34页 |
| 3.1.3 MTSase、MTHase在E.coli Origami (DE3)中的重组表达 | 第34-37页 |
| 3.1.4 重组蛋白酶学性质研究 | 第37-40页 |
| 3.2 重组E.coli Origami (DE3) 3L罐发酵优化 | 第40-44页 |
| 3.2.1 诱导时间对E.coli Origami (DE3) 高密度发酵的影响 | 第40-42页 |
| 3.2.2 诱导温度对E.coli Origami (DE3) 高密度发酵的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.3 乳糖流加速度对E.coli Origami (DE3) 高密度发酵的影响 | 第43-44页 |
| 3.3 MTSase、MTHase在B.brevis中的重组表达 | 第44-48页 |
| 3.3.1 重组菌的构建及摇瓶发酵 | 第45-47页 |
| 3.3.2 B.brevis 3L罐发酵 | 第47-48页 |
| 3.4 重组MTSase、MTHase双酶法制备海藻糖的研究 | 第48-52页 |
| 3.4.1 添加普鲁兰酶对海藻糖转化率的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.2 不同加酶量对海藻糖转化率的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.3 温度对海藻糖转化率的影响 | 第50页 |
| 3.4.4 pH对海藻糖转化率的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.5 底物浓度对海藻糖转化率的影响 | 第51-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 主要结论 | 第52页 |
| 展望 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
