| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 禽类卵巢及卵泡 | 第12-13页 |
| 1.1.1 禽类卵巢结构与发育特点 | 第12页 |
| 1.1.2 禽类卵泡发育与卵泡选择 | 第12-13页 |
| 1.1.3 禽类卵泡组织学构成 | 第13页 |
| 1.2 卵巢颗粒细胞 | 第13-14页 |
| 1.3 抗缪勒氏管激素 | 第14-17页 |
| 1.3.1 AMH的结构 | 第14页 |
| 1.3.2 AMH作用机制研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 AMH调控家禽的卵泡选择 | 第15-17页 |
| 第二章 鸡AMH基因敲除相关载体的构建及验证 | 第17-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌株，细胞系与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂配制 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.4 引物 | 第17-18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 鸡AMH基因敲除表达载体构建 | 第18-21页 |
| 2.2.2 SSA-RPG双荧光筛选报告载体的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.3 DF-1 细胞的培养和传代 | 第24页 |
| 2.2.4 DF-1 细胞的Puromycin筛选浓度 | 第24页 |
| 2.2.5 报告载体水平鸡AMH基因敲除表达载体活性检测 | 第24页 |
| 2.2.6 Puromycin筛选抗性阳性细胞 | 第24-25页 |
| 2.2.7 阳性DF-1 细胞基因组的提取 | 第25页 |
| 2.2.8 DF-1 细胞基因组靶序列的扩增 | 第25页 |
| 2.2.9 T7E1核酸内切酶检测突变 | 第25-26页 |
| 2.2.10 TA克隆检测DF-1 细胞突变效率 | 第26页 |
| 2.3 试验结果 | 第26-31页 |
| 2.3.1 鸡AMH基因敲除表达载体构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 相应的SSA-RPG双荧光筛选报告载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.3 DF-1 细胞的Puromycin筛选浓度的确定 | 第28页 |
| 2.3.4 报告载体水平鸡AMH基因敲除表达载体活性检测 | 第28-29页 |
| 2.3.5 转染后DF-1 细胞的Puromycin筛选 | 第29页 |
| 2.3.6 T7E1检测DF-1 细胞基因组水平AMH基因敲除效率 | 第29-30页 |
| 2.3.7 Puromycin筛选后DF-1 细胞TA克隆测序检测 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 鸡卵巢颗粒细胞的分离及传代培养优化 | 第33-42页 |
| 3.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 质粒与实验动物 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂配制 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器耗材 | 第33页 |
| 3.1.4 引物 | 第33-34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 鸡卵巢颗粒细胞的分离 | 第34页 |
| 3.2.2 鸡卵巢颗粒细胞的培养 | 第34页 |
| 3.2.3 优化鸡卵巢颗粒细胞培养体系 | 第34-35页 |
| 3.2.4 预铺鼠尾胶原 | 第35-36页 |
| 3.2.5 半换液培养与首次传代 | 第36页 |
| 3.2.6 鉴定鸡卵巢颗粒细胞 | 第36-37页 |
| 3.3 试验结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 鸡卵巢颗粒细胞的分离、培养 | 第37页 |
| 3.3.2 优化鸡卵巢颗粒细胞培养体系 | 第37-39页 |
| 3.3.3 预铺鼠尾胶原 | 第39页 |
| 3.3.4 半定量PCR | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 鸡卵巢颗粒细胞中AMH基因的功能研究 | 第42-50页 |
| 4.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 质粒与实验动物 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂及试剂配制 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器耗材 | 第42页 |
| 4.1.4 引物 | 第42-43页 |
| 4.2 试验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 鸡AMH及相关基因在卵泡发育各阶段的转录表达 | 第43-44页 |
| 4.2.2 适宜筛选鸡GCs的Puromycin浓度 | 第44页 |
| 4.2.3 敲除鸡卵巢颗粒细胞中AMH基因 | 第44页 |
| 4.2.4 Puromycin筛选富集鸡AMH敲除阳性GCs | 第44-45页 |
| 4.2.5 鸡GCs基因组水平的突变检测 | 第45页 |
| 4.2.6 鸡GCs中AMH改变后相关基因转录表达变化 | 第45-46页 |
| 4.3 试验结果 | 第46-48页 |
| 4.3.1 鸡AMH及相关基因在卵泡发育各阶段的转录表达 | 第46页 |
| 4.3.2 适宜筛选鸡GCs的Puromycin浓度 | 第46-47页 |
| 4.3.3 鸡GCs中报告载体水平上AMH敲除活性 | 第47页 |
| 4.3.4 AMH敲除鸡GCs阳性细胞筛选富集 | 第47页 |
| 4.3.5 鸡GCs基因组水平靶位点突变检测 | 第47页 |
| 4.3.6 鸡GCs中AMH改变后相关基因转录表达变化 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 4.4.1 鸡原代卵巢颗粒细胞AMH基因敲除 | 第48页 |
| 4.4.2 AMH改变后鸡GCs中相关基因表达变化 | 第48-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-50页 |
| 结论和创新点 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
