| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 双组分系统概述 | 第9页 |
| 1.2 双组分系统的组成和作用原理 | 第9-10页 |
| 1.3 磷酸转移化学 | 第10-11页 |
| 1.4 组氨酸蛋白激酶的结构与功能 | 第11页 |
| 1.5 反应调控蛋白的结构与功能 | 第11-13页 |
| 1.6 交叉调控 | 第13页 |
| 1.7 双组分系统的调控 | 第13-16页 |
| 1.8 光遗传学(Optogenetics)概述 | 第16页 |
| 1.9 光感受器(photoreceptors)概述 | 第16-17页 |
| 1.10 光敏色素(Phytochromes)概述 | 第17页 |
| 1.11 蓝藻感光色素(Cyanobacterial phytochrome 1,Cph1)的结构与功能 | 第17-21页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第21-51页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验菌株和载体 | 第21页 |
| 2.1.2 酶与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第22页 |
| 2.2 大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备 | 第22-25页 |
| 2.3 DH5α基因组抽提 | 第25-26页 |
| 2.4 从DH5α基因组中克隆目的片段 | 第26-30页 |
| 2.5 双酶切法构建重组质粒pCph1-pSP73 | 第30-36页 |
| 2.5.1 从蓝藻基因组中扩增Cph1片段 | 第30-31页 |
| 2.5.2 外源DNA片段与载体pSP73的双酶切 | 第31-33页 |
| 2.5.3 外源DNA片段与载体pSP73的连接 | 第33页 |
| 2.5.4 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α | 第33-34页 |
| 2.5.5 重组质粒鉴定 | 第34-36页 |
| 2.6 双酶切法构建重组质粒pHK-Cph1-pSP73 | 第36-37页 |
| 2.6.1 目的HK片段与pCph1-pSP73的双酶切 | 第36-37页 |
| 2.6.2 连接目的基因与载体pCph1-pSP73 | 第37页 |
| 2.6.3 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α | 第37页 |
| 2.7 重组质粒鉴定 | 第37-38页 |
| 2.7.1 质粒抽提 | 第37页 |
| 2.7.2 双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.7.3 测序鉴定 | 第38页 |
| 2.8 光响应的双组分系统库的构建 | 第38-39页 |
| 2.9 检测光响应功能所需的重组质粒的构建 | 第39-51页 |
| 2.9.1 PyeaR-RBS-GFPuv-Tr-pSP73质粒的构建 | 第39-41页 |
| 2.9.2 pPLPCB质粒的构建 | 第41-46页 |
| 2.9.3 PyeaR-RBS-GFPuv-Tr-NarXn-Cph1-pSP73重组质粒的构建 | 第46-49页 |
| 2.9.4 PyeaR-RBS-GFPuv-Tr-NarXn-Cph1-pSP73重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞DH5α | 第49-51页 |
| 第3章 大肠杆菌中光响应的双组分系统的功能检测 | 第51-63页 |
| 3.1 PyeaR-RBS-GFPuv-Tr-NarXn-Cph1-pSP73和pPL-PCB共转入JW1213感受态细胞中 | 第51-53页 |
| 3.1.1 大肠杆菌感受态细胞JW1213的制备 | 第51-52页 |
| 3.1.2 PyeaR-RBS-GFPuv-Tr-NarXn-Cph1-pSP73和pPL-PCB共转入JW1213感受态细胞中 | 第52-53页 |
| 3.2 光控信号转导通路实验 | 第53-60页 |
| 3.2.1 光控信号转导通路实验Ⅰ | 第53-55页 |
| 3.2.2 光控信号转导通路实验Ⅱ | 第55-57页 |
| 3.2.3 光控信号转导通路实验Ⅲ | 第57-59页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR | 第59-60页 |
| 3.3 小结 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第77页 |
