| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-15页 |
| 1.黑色素的形成和调控 | 第10-12页 |
| 1.1 黑色素细胞的形成 | 第10页 |
| 1.2 黑色素的合成与生化特征 | 第10-11页 |
| 1.3 黑色素的调控 | 第11-12页 |
| 2.Sox5对黑色素细胞的调控 | 第12-13页 |
| 3. miRNA和miR-21a-5p的生物学功能 | 第13-15页 |
| 3.1 miRNA的生物学功能 | 第13-14页 |
| 3.2 miRNA和黑色素形成的相关研究 | 第14-15页 |
| 试验一 miR-21a-5p内源性检测与对靶基因的预测 | 第15-30页 |
| 1 材料与方法 | 第15-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第15页 |
| 1.2 实验仪器及耗材 | 第15页 |
| 1.3 实验试剂 | 第15页 |
| 1.4 实验方法 | 第15-25页 |
| 1.4.1 RNA的提取和cDNA合成 | 第16-17页 |
| 1.4.2 引物设计 | 第17页 |
| 1.4.3 miR-21a-5p过表达载体的构建与验证 | 第17-19页 |
| 1.4.3.1 OligoDNA的设计和合成 | 第17-18页 |
| 1.4.3.2 OligoDNA的退火 | 第18页 |
| 1.4.3.3 OligoDNA的连接 | 第18-19页 |
| 1.4.3.4 转化 | 第19页 |
| 1.4.3.5 测序验证 | 第19页 |
| 1.4.4 miR-21a-5p过表达载体质粒的提取 | 第19-20页 |
| 1.4.5 Sox5 3'UTR的PCR扩增及克隆 | 第20-21页 |
| 1.4.5.1 Sox5 3'UTR的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 1.4.5.2 双荧光素酶报告靶基因Sox5的验证 | 第21页 |
| 1.4.6 pmirGLO-Sox5 3'UTR的定点突变 | 第21-23页 |
| 1.4.7 Sox5 3'UTR双荧光素报告载体与miR-21a-5p真核过表达载体共转染293T细胞 | 第23-24页 |
| 1.4.7.1 去内毒素质粒的提取 | 第23页 |
| 1.4.7.2 HEK 293 T细胞的培养 | 第23页 |
| 1.4.7.3 Sox5 3'UTR双荧光素报告载体与miR-21a-5p质粒共转染293T细胞 | 第23-24页 |
| 1.4.8 miR-21a及其靶基因Sox5的内源性表达 | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.1 miR-21a-5p的靶基因预测 | 第25页 |
| 2.2 小鼠皮肤总RNA完整性和纯度的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3 pmirGLO-Sox5 3'UTR的构建与Sox5 3'UTR的PCR扩增及克隆 | 第26-27页 |
| 2.4 pmirGLO-Sox5 3'UTR突变及测序 | 第27页 |
| 2.5 转染HEK 293T细胞之后的荧光活性检测 | 第27-29页 |
| 2.6 miR-21-5p及其靶基因Sox5的内源性表达 | 第29页 |
| 3 小结 | 第29-30页 |
| 试验二 转染黑色素细胞后miR-21a-5p和Sox5以及MITF的表达 | 第30-34页 |
| 1. 材料和方法 | 第30页 |
| 1.1 实验样本 | 第30页 |
| 1.2 实验仪器、试剂及耗材 | 第30页 |
| 1.2.1 实验仪器设备 | 第30页 |
| 1.2.2 实验试剂和耗材 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.1 miR-21a-5p质粒转染小鼠黑色素细胞 | 第30-31页 |
| 2.2 小鼠黑色素细胞RNA的提取及cDNA的合成 | 第31页 |
| 2.3 靶基因Sox5和下游基因MITF的检测 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-33页 |
| 3.1 miR-21a-5p转染小鼠黑色素细胞的效率 | 第32页 |
| 3.2 转染后细胞中miR-21a-5p和Sox5mRNA的表达水平 | 第32-33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 试验三 蛋白印记检测转染细胞中Sox5及MITF表达量变化 | 第34-40页 |
| 1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 1.1 实验样本 | 第34页 |
| 1.2 实验仪器设备,试剂和耗材 | 第34-35页 |
| 1.2.1 实验仪器及试剂 | 第34页 |
| 1.2.2 实验需要的试剂及配制 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.1 黑色素细胞总蛋白的提取 | 第36页 |
| 2.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 2.3 蛋白质的转膜与显色 | 第37-38页 |
| 2.4 蛋白免疫印记图像和数据的分析 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 试验四 miR-21a-5p转染细胞后黑色素的测定 | 第40-42页 |
| 1 材料和方法 | 第40-41页 |
| 1.1 实验样本 | 第40页 |
| 1.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41页 |
| 3 小结 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 全文总结 | 第44-45页 |
| 创新与展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| Abstract | 第50页 |
| 致谢 | 第52页 |
